1990 Fiscal Year Annual Research Report
オロット酸尿症における代謝調節の破綻と回復のメカニズムに関する分子遺伝学的研究
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01480262
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| Research Institution | Nagoya City University |
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Principal Investigator |
和田 義郎 名古屋市立大学, 医学部, 教授 (30004849)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
杉山 成司 名古屋市立大学, 医学部, 助手 (50150777)
矢崎 信 名古屋市立大学, 医学部, 助手 (80133479)
小林 正紀 名古屋市立大学, 医学部, 助手 (50170353)
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| Keywords | オロット酸尿症 / cDNA クロ-ニング / ODC / OPRT / ウリジン / UMP 合成酸素 / 塩基配列 / 1塩基置換 |
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| Research Abstract |
(1)正常者の溶血液よりヒトODCの精製を行った。
(2)正常者ヒトODCのcDNAのcloningを行った。
cDNAの構造の検討により、OPRTdomainとODCdomainが1つのopen reading frameの中に存在することがヒトにおいても証明することができた。
(3)本疾患の本邦第一例より得られた、皮膚線維芽細胞、リンパ芽球細胞は、本疾患の治療に使用しているuridineを培地中に添加することにより正常対照細胞と同様な反応性が得られることが確かめられた。
(4)患者のリンパ芽球細胞を用いて、mutantUMPS cDNAの解析を行った。(UMPS=OPRT+ODC)
1)患者のリンパ芽球細胞を用いて、正常ヒトUMPS cDNAをprobeとしてNorthern blottingを行った結果、患者mRNAの発現は量、その鎖長ともに正常対照と差異は見いだせなかった。小さな部位における変異が示唆された。
2)次に、患者cDNA libraryを作製し、正常ヒトUMPS cDNAをprobeとしてscreeningしpositive cloneをsequenceした結果、アミノ酸変異をともなった:Val(GGA)→Gly(GTA)mutantUMPS cDNAをみいだした。現在mutantUMPS cDNAのtransfection、発現実験を計画中である。
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[Publications] 森下 秀子: "乳児早期に診断し得たオロット酸尿症の1例(本邦第1例)" 日本小児科学会雑誌. 90. 2775-2778 (1986)
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[Publications] Mariko Suchi: "Molecular genetic studies on hereditary orotic aciduria.Purification of human orotidine 5'ーmonophosphate decarboxylase and cloning of its cDNA." Nagoya Medical Journal. 32. 207-220 (1988)
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[Publications] Makoto Yazaki: "Increase of protein synthesis by uridine supplement in lectinーstimulated peripheral lymphocytes and EB virusーtransformed B cell of hereditary orotic aciduria." Tohoku Journal of Experimental Medicine. 153. 189-195 (1987)
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[Publications] 須和 万里子: "先天性オロット酸尿症の本態に関する分子遺伝学的研究" 日本先天代謝異常学会雑誌. 5. 23-33 (1989)
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[Publications] 坪井 隆: "先天性オロット酸尿症における遺伝子変異の証明" 名古屋市立大学医学会雑誌.
