1990 Fiscal Year Annual Research Report
TRH欠損症における人proTRHcDNA塩基配列異常の研究
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01480284
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| Research Institution | Gunma University |
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Principal Investigator |
森 昌朋 群馬大学, 医学部, 講師
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| Keywords | TRH / proTRH / cDNA / proTRH cDNA |
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| Research Abstract |
1.pro TRHの合成とその抗体作製:pro TRH(LysーArgーGlnーHisーGlyーLysーArg)をペプチド研究所にて作製し、glutaraldehydeにてBSAとconjugateし、家兎に免疫を繰り返す事により、最終希釈濃度4,000倍の抗体が得られ、TyrーproTRHを標識抗原とするR/A系ではproTRHに特異性の高い事が認められた。ラット,人視床下部中にもproTRH様活性が認められた。この活性はhigh performance gel filtration chromatographyにおいて、authentic proTRHピ-クと一致した。またラット視床下部においては甲状腺摘除後proTRHは上昇し、T_3投与により速やかに減少した。
2.人及びマウスproTRHcDNAの決定:ラットproTRHcDNA seguenceの5′側並びに3′側(antiーsense)oligonucteotidesをDNAシンセサイザ-で合成し(各々に20〜25mer)、人及びマウス視床下部RNAよりrererse transcriptidaseで合成したcDNAをtemplateとし、polymerase chain reaction法によりamplificationを行った。5′cDNA amplificationはuntranslatea regionと、coding regionをprimerとしてamplificationを行った。また3′end amplificationは最初oligo(dT)primerでamplificationを行い、(Sal I酵素認識部位を含む)、次いで25merのprimerとoligo(dT)primerとの間でamplificationを行い、更にinside primerとSal I認識部位との間でamplificationを行った。これらのfragmentsをpGEM3Z vectorにsubcloningし、dideoxynucleotideーtermination法によりseguenaを行った。Northern blot解析、translated proteinの抗proTRH抗体沈障法により、これらが、人及びマウスproTRHcDNAである事が決定された。
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[Publications] Mori M.etal: "A possible direct precursor of thyrotropinreleasing hormone,pGluーHisーProーGly,stimulates prolactin secretion in anorexra nervosa" J Clin Endocriuol Metab. 71. 252-255 (1990)
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[Publications] Mori M.etal: "Stimulation by a TRH precursor,TRHーGly,of TSH and PRL secretion in rats:effect of staruation" Neuropeptides. 16. 57-62 (1990)
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[Publications] Murakami M.and Mori M.: "Identification of immunogenic regious in human thyrotropir receptor for immuuoglobulin G of patlents un'th Grares′ disease" Biochem Bioplys.Res Commun. 171. 512-518 (1990)
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[Publications] Yamada M.and Mori M.: "Thyrotropinーreleasing hormoulーdegrading enzymein human serum is classifred as type II of pyroglutamyl aminopeptidase:influence of thyroid status" Proc.Soc Exp Brol Med. 194. 346-351 (1990)
