病原因子を指標にした下痢原因菌の迅速な免疫学的検出法の開発

1989 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 01870020
• Research Category: Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 三輪谷 俊夫 大阪大学, 微生物病研究所, 教授 (60029759)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 坂本 雅子 財団法人阪大微生物病研究会, 係長 ; 有田 美知子 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (10127178) ; 余 明順 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (70093482) ; 山本 耕一郎 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (30158274) ; 本田 武司 大阪大学, 微生物病研究所, 助教授 (60029808)
• Keywords: 毒素原性大腸菌 / 腸炎ビブリオ / 線毛 / 定着因子 / 蛋白毒素 / ELISA

Research Abstract

本年度は下記の項目に分けて研究を進め、以下の結果を得た。
1.定着因子に関する研究:腸炎ビブリオの線毛の精製を行いモノクロ-ナル抗体の作成を行った。また、毒素原性大腸菌のCFA/II(CS_2)線毛の精製を行い諸性状を明らかにするとともに、我々が見い出したCFA/III線毛に対するモノクロ-ナル抗体の作成にも成功した。エロモナス線毛の精製もできたので、現在特異抗体を作成中である。また、これらの研究の遂行途中に毒素原性大腸菌の新しい定着因子と考えられる線毛も見い出し、現在検討中である。
2.蛋白毒素に関する研究:毒素原性大腸菌の易熱性エンテロトキシン(LTh)に対するモノクロ-ナル抗体を作成した。また,腸炎ビブリオの耐熱性溶血毒(TDH)およびその類似毒素に対するモノクロ-ナル抗体を作成し、それぞれに特異的な抗原決定基とともに共通な抗原決定基の存在が示唆できた。さらに、プロテア-ゼと血球凝集活性を合せ持つナグビブリオ由来のHA/proteaseを精製するとともにモノクロ-ナル抗体の作成にも成功した。
3.病原因子の検出系の開発:上述の定着因子あるいは蛋白毒素に対する抗体(単クロ-ンおよびポリクロ-ナル抗体)を用いて、特異的な検出法の開発を試みている。腸炎ビブリオTRHについてはElek変法の応用で検出することができる系を確立した。また、毒素原性大腸菌のCFA/IIIを検出するELISAの系を確立することもできた。
4.病原因子検出系の応用的研究:上述の新たに開発できた病原因子の検出系の実用性を、現在、大阪空港検疫所の協力を得て検討中である。

Research Products

• [Publications] Honda,T.,Y.Ni,and T.Miwatani: "Purification of a TDH-related hemolysin produced by a kanagawa phenomenon-negative clinical isolate of Vibrio parahaemolyticus" FEMS Microbiol.Lett.,. 57. 241-246 (1989)
• [Publications] Miyake,M.,T.Honda,and T.Miwatani: "Effects of divalent cations and polysaccharides on Vibrio metschinikovii cytolysin-induced hemolysis of rabbit erythrocytes" Infection and Immunity. 57. 158-163 (1989)
• [Publications] Sato,M.,M.Arita,T.Honda,and T.Miwatani: "Characterization of a pilus produced by Aeromonas hydrophila." FEMS Microbiol.Lett.59. 325-330 (1989)
• [Publications] Honda,T.,N.Cakir,M.Arita,and T.Miwatani: "Purification and characterization of the CS2 pili of colonization factor antigen II produced by human enterotoxigenic Escherichia coli" Microbiol.Immunol.33. 265-275 (1989)
• [Publications] Honda,T.,L.Lertocasombat,A.Hata,T.Miwatani,and R.A.Finkelstein: "Purification and partial characterization of a protease produced by Vibrio cholerae non-01" Infection and Immunity. 57. 3452-3457 (1989)
• [Publications] Honda,T.,Y.Ni,M.Yoh,and T.Miwatani: "Production of monoclonal antibodies against thermostable direct hemolysin of Vibrio parahaemolyticus and application of the antibodies for ELISA" Medical Microbiology and Immunology. 178. 245-253 (1989)
• [Publications] Honda,T.,Y.Ni,M.Yoh,and T.Miwatani: "Evidence of immunological cross-reactivity between hemolysins of Vibrio parahaemolyticus and Vibrio hollisae demonstrated by monoclonal antibodies." J.Infect.Dis.160. 1089-1090 (1989)
• [Publications] Honda,T.,Y.Ni,S.Hori,and T.Miwatani: "A mutant hemolysin with lower biological activity produced by a mutant Vibrio parahaemolyticus." FEMS Microbiol.Lett.61. 95-100 (1989)
• [Publications] Nishibuchi,M.,T.Taniguchi,T.Misawa,V.Khaemanee-Iam,T.Honda,and T.Miwatani: "Cloning and nucleotide sequence of the gene(trh)encoding the hemolysin related to the thermostable direct hemolysin of Vibrio parahaemolyticus." Infection and Immunity. 57. 2691-2697 (1989)
• [Publications] Yoh,M.,T.Honda,and T.Miwatani: "Homogeneity of a hemolysin(Vh-rTDH)produced by clinical and environmental isolates of Vibrio hollisae." FEMS Microbiol.Lett.61. 171-176 (1989)
• [Publications] Iida,T.,T.Tsuji,T.Honda,T.Miwatani,S.Wakabayashi,K.Wada,and H.Matsubara: "A single amino acid substitution in B subunit of Escherichia coli enterotoxin affects its oligomer formation" Journal of Biological Chemistry. 264. 14065-14070 (1989)
• [Publications] Honda,T.,N.Wetprasit,M.Arita,and T.Miwatani: "Pilus colonization factors of enterotoxigenic Escherichia coli isolated from infantile diarrheal patients in Pupua New Guinea." Am.J.Trop.Med.Hyg.41. 220-223 (1989)