細胞培養法を応用したハイブリッド型体内型人工食道の開発に関する研究

1992 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 02670588
• Research Institution: Keio University
• Principal Investigator: 安藤 暢敏 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (90101972)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 愛甲 聡 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (70202439) ; 北川 雄光 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (20204878) ; 長島 敦 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (80198316)
• Keywords: ハイブリッド型人工食道 / 正常ヒト食道上皮細胞培養 / コラーゲンゲル培養 / 再構築型人工食道 / 移植

Research Abstract

ハイブリッド型人工食道開発のため、正常ヒト食道上皮を用いて以下の実験をおこなった。
1.正常ヒト食道上皮細胞の初代培養法の検討
ヒト食道上皮細胞の初代培養において、ディスパーゼとトリプシンを用いることにより確実で効率の良い培養法を確立した。本法を用いることにより、0.5cm^2の食道粘膜より約1週間で30cm^2cmの面積のシャーレをconfluentにすることが可能となった。種々の条件で培養状態を検討した結果、無血清培地(KGM)は細胞の増殖に適すること、血清の添加は細胞の分化を誘導し増殖を阻害すること、プラスチックシャーレをコラーゲンコーティングした方が細胞接着が良好であることがわかった。
2.正常ヒト食道上皮細胞のコラーゲンゲル培養法の検討
1.で確立した方法を用いて、ヒト食道上皮細胞のコラーゲンゲル上での培養(付着コラーゲンゲル培養)に成功した。さらにコラーゲンゲルを浮遊させる(浮遊コラーゲンゲル培養)ことにより培養細胞は3〜4層に重属化し、細胞は球形化しより生体に近い形態を示した。
3.培養ヒト食道上皮細胞シートの作製とヌードマウス広背筋への移植実験
2.の浮遊コラーゲンゲル培養で作製された培養食道上皮細胞とコラーゲンゲルからなるシートを、ヌードマウス広背筋表面に移植した。移植した培養食道上皮細胞は生着し徐々に重層化の程度を増加させ、移植16日までにほぼ生体に近い状態に再構築された。また、コラーゲン層内へは結合織の進入と血管新生の増生が認められた。

Research Products

• [Publications] 長島 敦: "人工食道実用化のための細胞培養法を用いた上皮化に関する実験的研究" 最新醫學. 45. 2059-2060 (1990)
• [Publications] 長島 敦: "培養表皮細胞を応用した人工食道開発に関する実験的研究" 人工臓器. 20. 631-634 (1991)
• [Publications] 佐藤 道夫: "細胞培養法を応用した人工食道内腔の上皮化に関する実験的研究" PROGRESS IN MEDICINE. 11. 3143-3144 (1991)
• [Publications] 佐藤 道夫: "ハイブリッド型人工食道内腔上皮化のための基礎的研究" PROGRESS IN MEDICINE. 11. 2851-2852 (1992)
• [Publications] Michio Sato: "Experimental Study of a Hybrid Artificial Esophagus Using Cultured Human Esophageal Epithelial cells" ASAIO Journal (July/September). (1993)
• [Publications] 佐藤 道夫: "培養ヒト食道上皮細胞を用いたハイブリッド型人工食道開発における基礎的研究" PROGRESS IN MEDICINE. (1993)