歯周病原性細菌の表層にある抗原性の強い蛋白質のクロ-ニング

1990 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 02670821
• Research Institution: Aichi Gakuin University
• Principal Investigator: 吉村 文信 愛知学院大学, 歯学部, 教授 (50001962)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 加藤 熈 北海道大学, 歯学部, 教授 (60001020) ; 尾関 正美 愛知学院大学, 歯学部, 講師 (80090124) ; 小佐野 悦雄 愛知学院大学, 歯学部, 講師 (80110998) ; 日比 栄子 愛知学院大学, 歯学部, 講師 (50097606) ; 小林 やす子 愛知学院大学, 歯学部, 助教授 (20064818)
• Keywords: 歯周病原性細菌 / 表層蛋白質 / 遺伝子 / クロ-ニング / ポルフィロモナス・ジンジバリス / 75K蛋白質

Research Abstract

成人性歯周炎の有力な原因菌であるPorphyromonas(Bacteroides)gingivalisの外膜に存在すると考えられる75K蛋白質のクロ-ニングを目的としている。この蛋白質は強い抗原性のあることがわかっている。〔方法〕75K蛋白質を精製し、N末端アミノ酸配列を決定する。このアミノ酸配列に対応する複数のDNAプロ-ブを合成する。このDNAプロ-ブを使用して本菌染色体DNAにあると考えられる遺伝子を検索した。〔結果〕75K蛋白質を精製し、36番目まで、N末端のアミノ酸配列を決定した。この配列の中で、18番目がトリプトファンで、31番目がメチオニンであった。このニつのアミノ酸に対応するコドンは、それぞれ、UGGとAUGのみである。そこで、この重複のないコドンをそれぞれ含む二種類のDNAプロ-ブ(20量体)を合成した。このDNAプロ-ブの5^1末端を ^<32>Pで標識し、このプロ-ブの結合するDNA断片の存在とサイズを、本菌染色体DNAで検索した。すると、PstIで、1.7kb、BamHIで4.2kbのDNA断片にプロ-ブが結合することが判明した。そこで、上記の断片をクロ-ニングすべく、PstI,BamHIを使って作成したpUC19のリコンビナントをあわせて5000株余りスクリ-ニングした。この結果,BamHIで作成したリコンピナントから1個の陽性クロ-ンを発見した。このリコンビナントは、予想どおり、4.2kbのBamHI断片を組込んでいたので、期待したとおり、75K蛋白質遺伝子をクロ-ン化したものと考えている。〔今後の展望〕4.2kbのBamHI断片を組込んだクロ-ンに、目的とする遺伝子の全域が存在するのか否かさらに、このクロ-ンは75K蛋白質を発現するのか否かなどについて検討を進めると共に、塩基配列を決定するための準備をおこないたいと考えている。