1991 Fiscal Year Annual Research Report
歯周病原性細菌の表層にある抗原性の強い蛋白質のクロ-ニング
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02670821
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| Research Institution | Aichi-Gakuin University |
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Principal Investigator |
吉村 文信 愛知学院大学, 歯学部, 教授 (50001962)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
加藤 ひろし 北海道大学, 歯学部, 教授 (60001020)
池田 健 愛知学院大学, 歯学部, 講師
尾関 正美 愛知学院大学, 歯学部, 講師 (80090124)
小佐野 悦雄 愛知学院大学, 歯学部, 講師 (80110998)
日比 栄子 愛知学院大学, 歯学部, 講師 (50097606)
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| Keywords | 歯周病原性細胞 / 表層蛋白質 / 遺伝子 / クロ-ニング / ポルフィロモナス・ジンジバリス / 75K蛋白質 |
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| Research Abstract |
歯周病原性菌として最も疑われている細胞Porphyromonas(Bacteroides)gingivalisの層表蛋白質は、ホストの免疫応答、ひいては病気の発症に強く関連しているはずである。なぜなら、歯の最表層に存在することから、真先にホストに認識されると考えられるからである。申請者らは本菌の表層にある抗原性の強い主要蛋白質の一つである75K蛋白質を精製し、この蛋白質のより深い研究と臨床応用のために構造遺伝子のクロ-ン化を行なうことを目的とした。
初年度、本蛋白質遺伝子を含むと考えられるBam HI DNA断片をpUCプラスミッドにクロ-ン化した。2年度はこの断片の制限酵素マップを作成した。さらにクロ-ン化に使ったプロ-ブの結合位置、すなわちN末端部位が、上記のマップとどの領域に存在するのかを決定した。これにより、少なくとも遺伝子の大部分はこのDNA断片上にあることが判明した。さらに得られたリコンビナントの遺伝子産物を抗体でスクリ-ニングし、遺伝子の全域が含まれているのか否かを検討した。しかし上記のリコンビナントからは、特異抗体で探索しても、いかなる遺伝子産物も検出できなかった。そこで、より強力な発現ベクタ-につなぎ換えて、再度同様な検討を行なったところ、75K蛋白質より少し大きな77Kの分子量を持った蛋白質が検出された。これにより、遺伝子の全領域がこのクロ-ン化されたDNA断片上に存在する可能性が一段と高くなった。今後、構造遺伝子の全域とその上流のプロモ-タ-領域の塩基配列の決定を行い、本蛋白質の一次構造とその発現調節についての情報を得るべく研究を進める予定である。
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[Publications] Watanabe,K.,T.Takasawa,F.Yoshimura,M.Ozeki,M.Kawanami and H.Kato.: "Molecular Cloning and Expression of a Major Surface Protein(the 75Kilodalton Protein)of Porphyromonas (Bacteroides)gingivalis in Escherichia coli." FEMS Microbiology Letters. (1992)
