熱帯熱マラリア原虫47kDタンパクの遺伝子解析と免疫学的機能に関する研究

1993 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 03404024
• Research Institution: Gunma University
• Principal Investigator: 鈴木 守 群馬大学, 医学部, 教授 (60056033)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 小寺 重孝 日本モンキーセンター, 園長 (40072673) ; 中村 正聡 群馬大学, 医学部, 助手 (10251092) ; 狩野 繁之 群馬大学, 医学部, 講師 (60233912)
• Keywords: マラリア / 熱帯熱マラリア原虫 / 遺伝子解析 / 免疫学 / ワクチン / 疫学

Research Abstract

マラリアワクチン開発研究においては流行地住民の免疫状態を調査した結果をもとにマラリア原虫防御関与抗原を特定することが必要である。われわれは、マラリア患者および、マラリア流行地住民の協力を得て、マラリア原虫に対するポリクローナル抗体を得て熱帯熱マラリア原虫の47kDタンパクが急性期の感染の免疫反応に関与することを見出した。47kDタンパクに対するモノクローナル抗体を作製し培養によって得た熱帯熱マラリア原虫との反応性をレーザースキャン蛍光顕微鏡法によってしらべてみたところ、47kDタンパクは分裂体の発育段階にある原虫により提示される抗原であることが判明した。分裂体抗原は防御に関与する例が多いので、この知見は47kDタンパクが防御関与抗原であること、すなわちマラリアワクチンの候補物質として有望であることを示す結果と考えた。そこで47kDタンパクの遺伝子を特定し、47kDタンパクの構造を解析し、防御免疫性について検討することを課題とした。培養した熱帯熱マラリア原虫をもとにcDNAライブラリーを用意しλgtllに繋いで細胞に導入し、すでに用意されたポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体によって目的とするタンパクを発現している細胞を選別しクローン化した。この作業をもとに47kDタンパクの遺伝子配列をきめたところ、すでに報告されたヒトの遺伝子配列と一致する結果となった。その理由は現在不明である。現在HPLC法により原虫抗原から47kDタンパクを純化しアミノ酸配列をきめる実験を進め、間もなくその結果が得られるので、この結果との対照により検討する予定である。また実験動物を使用して防御免疫をしらべた結果、INF-γやTNF-αは防御と同時に免疫学的障害にも関与することを示唆する結果を得た。さらに熱帯地住民の調査から熱帯熱マラリア原虫の23kDタンパクが慢性期の防御関与抗原であることを示唆する結果を得た。

Research Products

• [Publications] Sugioka,Y. Suzuki,M.: "The Chemical basis for the ferriproto-porphyrin IX-chloroquine complex induced lipid peroxidation" Biochemica et Biophysica Acta. 16. 467-468 (1991)
• [Publications] Suzuki,M.: "Malaria immuno-epidemiology -A trial to link field study with basic science" The Kaohsiung Journal of Medical Science. 7. 224-232 (1991)
• [Publications] Waki,S. Uehara,S. Kanbe,K. et al.: "The role of T cells in pathogenesis and protective immunity to murine malaria" Immunology. 74. 646-651 (1992)
• [Publications] Waki,S Nakane,K Zhu,M et al.: "A DNA hybridation assay for use in drug sensitivity test in vitro for P.falciparum under field condition" Trans Roy Soc Trop Med Hyg.86. 227-228 (1992)
• [Publications] Kano,S. El Safi,S.H. Omer,F.M. et al.: "Antibody frequency distribution curve for risk assessment of a malaria epidemic in the Sudan" Japnese Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 21. 207-211 (1993)
• [Publications] Kano,S. Utsunomiya,Y. Honda,A.T. et al.: "Malaria serology as an alternative to parasite detection in a highly endemic community in Amazon" Japanese Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 21. 213-217 (1993)
• [Publications] Kano,S. Masuda,G. Suzuki,M.: "Four imported cases of falciparum malaria successfully treated with falfantrine" Japanese Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 21. 467-468 (1993)
• [Publications] Tongol-Rivera,P.T., Kano,S., Miguel,E., et al.: "Application of seroepidemiology in identification of local foci in a malarious community in Palawan,the Philippines" American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 49. 608-612 (1993)
• [Publications] Kawai,S. Aikawa,M. Kano,S. Suzuki,M.: "A primate model for severe human malaria with cerebral involvement:Plasmodium coatneyi-infected Macaca fuscata" American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 48. 630-636 (1993)
• [Publications] Kawai,S. Kano,S. Suzuki,M.: "Morphologic effects of artemether on Plasmodium in Aotus trivirgatus" American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 49. 812-818 (1993)
• [Publications] Sato,K. Kano,S. Hida,M.M. et al.: "Comparative evaluation of field applicability of a malaria ABC-ELISA with other serological methods." Japanese Journal of Parasitology. 42. 313-320 (1993)
• [Publications] Sato,K. Nagai,Y. Suzuki,M.: "Purification and partical characterization of and acid protease from Dirofilaria immitis" Molecular and Biochemical Parasitology. 58. 293-300 (1993)
• [Publications] Waki,S. Kurihara,R. Nemoto,H. Suzuki,M.: "Effect of recombinant human colony-stimulating factor on the course of parasitaemia in non-lethal rodent malaria" Parasitology Research. 79. 703-705 (1993)
• [Publications] Akanmori,B.D. Waki,S. Suzuki,M.: "Immunoglobulin G2a isotype may have a protective role in Plasmodium bergehi NK65 infection in immunised mice" Parasitology Research. (submitted).
• [Publications] Akanmori,B.D. Waki,S. Suzuki,M.: "Early secretion of INF-gamma and TNF-alpha by spleen cells for the protection against Plasmodium bergehi NK65 infection in CBA mice" Parasitology Reserach. (submitted).
• [Publications] 小島荘明編集(分担): "NEW寄生虫病学" 南江堂, 412 (1993)