1991 Fiscal Year Annual Research Report

生体内におけるキシロシルグルコ-ス型糖鎖の蛍光標識法を用いる検索

Research Project

Project/Area Number	03453164
Research Institution	Osaka University
Principal Investigator	長谷純宏大阪大学, 理学部, 教授 (80028232)
Keywords	ピリジルアミノ化 / キシロ-ス / HPLC / 蛍光標識 / 尿 / 肝臓 / 少糖 / 糖鎖
Research Abstract	キシロシルグルコ-ス型の糖鎖(XylーGlc,XylーXylーGlc)はウシ及びヒト血液凝固VII因子とIX因子に最初発見された。この糖鎖の生理的意議は現在の所不明であるので、この新しい糖鎖の生体内での生理活性について足掛かりをつかむため生体内のキシロシルグルコ-ス型糖鎖の分析を計画した。このために高感度な蛍光標識法を用いてこれら糖鎖の検出を行なうことにした。 1)ヒト尿中での検索。ヒト尿中には以前にXylーGlcが検出されている。これは生体中の糖蛋白質の代謝産物であると考えられる。そうするとXylーXylーGlcも既にヒトの糖蛋白質中に存在が明らかにされているため尿中の存在に興味が持たれるので三糖の検出を行なった。ヒト尿の透析外液をBioーGel Pー2カラムで糖鎖分画をとり、ピリジルアミノ化を行なった。BioーGel Pー2カラムで標準のピリジルアミノ化した二糖と三糖の溶出位置を分取した。これらを逆相のHPLCでピリジルアミノ化した二糖と三糖の画分をそれぞれ分取した。更に順相HPLCとの逆相のHPLCで分取し、単一の目的物を得ることが出来た。二次元糖鎖マップでXylーXylーGlcと同定出来たが、現在さらにこれらの構造を解析中である。 2)キシロシルグルコ-ス型の糖鎖の存在をウシ肝臓を用いて検出方法の確立を行なった。凍結乾燥した肝臓をヒドラジン分解ーNーアセチル化法で切り出し、ピリジルアミノ化した。これをTSKgel HW40ーFのゲルろ過で二糖と三糖の位置を分取し、各分画を逆相・順相・逆相の順番で精製した。肝臓全体から行なうため、夾雑物から分離する方法についての条件検討について行なった。現在肝臓の細胞分画を行なう予定である。これが出来ると細胞内の分布が判明すると思われる。

Research Products

(8 results)

All Other

All Publications (8 results)

[Publications] H.Oku: "Studies on the Substrate Specificity of Neutral αーMannosidase Purified from Japanese Quail Oviduct by Using Sugar Chains from Glycoproteins" J.Biochem.110. 982-989 (1991)
[Publications] H.Oku: "Purification and Characterization of Neutral αーMannosidase That is Activated by Co^<2+> from Japanese Quail Oviduct" J.Biochem. 110. 29-34 (1991)
[Publications] K.Omichi: "Studies on the Active Site of Human αーAmylase:Examination of the Third Subsite S3' of the AglyconeーBinding Site by Control of Substrate Binding Mode" J.Biochem.111. 4-7 (1992)
[Publications] T.Mega: "Determination of LectinーSugar Binding Constants by Microequilibrium Dialysis Coupled with High Performance Liquid Chromatography" J.Biochem. 109. 600-603 (1991)
[Publications] T.Mega: "Characterization of CarbohydrateーBinding Specificity of Concanavalin A by Competitive Binding of Pyridylamino Sugar Chains" J.Biochem.111. 396-400 (1992)
[Publications] H.Watzlawick: "The Effect of the Carbohydrate Moiety upon the Size and Conformation of Human Plasma Galactoglycoprotein as Judged by Electron Microscopy and Circular Dichroism" Biochem.J.277. 753-758 (1991)
[Publications] 長谷純宏: "複合糖質の糖鎖研究における新しい方法論とその展望ーピリジルアミノ化の役割ー" 生化学 63, 11 (1991)
[Publications] 長谷純宏: "糖蛋白質の糖鎖構造解析へのNMRの応用" ファルマシア, 3 (1991)

1991 Fiscal Year Annual Research Report

生体内におけるキシロシルグルコ-ス型糖鎖の蛍光標識法を用いる検索

Principal Investigator

長谷 純宏 大阪大学, 理学部, 教授 (80028232)

Research Products

[Publications] H.Oku: "Studies on the Substrate Specificity of Neutral αーMannosidase Purified from Japanese Quail Oviduct by Using Sugar Chains from Glycoproteins" J.Biochem.110. 982-989 (1991)

[Publications] H.Oku: "Purification and Characterization of Neutral αーMannosidase That is Activated by Co^<2+> from Japanese Quail Oviduct" J.Biochem. 110. 29-34 (1991)

[Publications] K.Omichi: "Studies on the Active Site of Human αーAmylase:Examination of the Third Subsite S3' of the AglyconeーBinding Site by Control of Substrate Binding Mode" J.Biochem.111. 4-7 (1992)

[Publications] T.Mega: "Determination of LectinーSugar Binding Constants by Microequilibrium Dialysis Coupled with High Performance Liquid Chromatography" J.Biochem. 109. 600-603 (1991)

[Publications] T.Mega: "Characterization of CarbohydrateーBinding Specificity of Concanavalin A by Competitive Binding of Pyridylamino Sugar Chains" J.Biochem.111. 396-400 (1992)

[Publications] H.Watzlawick: "The Effect of the Carbohydrate Moiety upon the Size and Conformation of Human Plasma Galactoglycoprotein as Judged by Electron Microscopy and Circular Dichroism" Biochem.J.277. 753-758 (1991)

[Publications] 長谷 純宏: "複合糖質の糖鎖研究における新しい方法論とその展望ーピリジルアミノ化の役割ー" 生化学 63, 11 (1991)

[Publications] 長谷 純宏: "糖蛋白質の糖鎖構造解析へのNMRの応用" ファルマシア, 3 (1991)

長谷純宏大阪大学, 理学部, 教授 (80028232)

[Publications] 長谷純宏: "複合糖質の糖鎖研究における新しい方法論とその展望ーピリジルアミノ化の役割ー" 生化学 63, 11 (1991)

[Publications] 長谷純宏: "糖蛋白質の糖鎖構造解析へのNMRの応用" ファルマシア, 3 (1991)