1992 Fiscal Year Annual Research Report
トランスジェニックマウスによる胎盤におけるヒト・プロラクチン発現制御因子の検討
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03670017
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
相磯 貞和 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (60138013)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
平岡 芳樹 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (80218768)
塩沢 昌英 慶應義塾大学, 医学部, 専任講師 (50170840)
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| Keywords | トランスジェニックマウス / 胎盤 / プロラクチン / 発現制御因子 |
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| Research Abstract |
本研究は頭書の如く、3年間にわたって行なわれるものであり、平成4年度はその2年目にあたる。初年度である平成3年度のおいては、トランスジェニックマウス製作の為に導入されるべき遺伝子の調製を行なったが、2年目である平成4年度は、その調整を継続して行なった。即ち、導入遺伝子コンストラクトとして、我々がクローン化したヒト・プロラクチン(hPRL)遺伝子のクローンより胎盤特異的制御領域と予想されるexon Φの5'側領域とE.coliのlacZ遺伝子をlinkさせてベクターであるpuc 119内に組み込み、そのベクターによりE.coli JM109をtransformして、増殖させ、プラスミドDNAを精製した。更に、この精製DNAよりinsert部分を制限酵素により切り出し、sucrose gradient法により精製し、Tris/EDTA bufferにより1ng/μlの濃度で調製し、microinjection用DNA溶液に供した。
次に、このconstruct溶液を用いて、トランスジェニックマウスの作製を試みた。background strainとして(C57Bl/6J X CBA)F1を用い、このF2受精卵を人工排卵させてそれを採取し、その雄性前核内に、微分干渉装置を備えた倒立顕微鏡下でmicromanupulatorとmicroinjectorを用いてconstruct DNA溶液をmicroinjectした。その後、受精卵を、精管結紮雄マウスと一晩mateさせて作製した偽妊娠ICR雌マウスの卵管内に移植し、新生児マウスとして出産させた。本報告書作成時点においては、出生マウス中の導入遺伝子の存在を、hPRL遺伝子およびlac Z遺伝子をプローブとするSouthern blot analysisにより行なっている段階である。
更に、平成5年度においては、当初の目的であるトランスジェニックマウスのラインの確立をはかると共に、それらのマウスにおける導入遺伝子の発現を、導入遺伝子産物であるgalactosidaseの酵素活性を利用した酵素組織化学的手法による組織学的に検索を行なう予定である。
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Research Products
(3 results)
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[Publications] Yasuda,K., Yamashita,S., Shiozawa,M.,Aiso,S. & Yasui,Y.: "Application of ultrasound for tissue fixation: Combined use with microwave to enhance the effect of chemical fixation" Acta Histochem, Cytochem.25. 237-244 (1992)
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[Publications] Jacob,C.O., Aiso, S., Schreiber, R.D. & MacDevitt, H.O.: "Monoclonal anti-tumor necrosis factor antibody renders non-obese diabetic mice hypersensitive to irradiation and enhance insulitis development" International Immunol.4. 611-614 (1992)
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[Publications] Shiozawa, M., Yasuda,K., Yamashita,S. & Aiso, S.: "Distribution of gamma-glutamyl transpeptidase in human salivary glands - Immunohistochemical study using a monoclonal antibody" J. Histochem. Cytochem.41. 205-213 (1993)
