1992 Fiscal Year Annual Research Report
ヒト胚細胞腫瘍ー初期胚モデルーにおける増殖と分化の調節機構
| Project/Area Number |
03670770
|
|---|
| Research Institution | Chiba University |
|---|
Principal Investigator |
関谷 宗英 千葉大学, 医学部, 助教授 (00092065)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
河田 誠 千葉川鉄病院, 部長
|
|---|
| Keywords | 胎児性癌 / 分化 / N-myc / HMBA / トランスフェクション / 奇形癌 / 神経ロゼット / 細胞外基質 |
|---|
| Research Abstract |
1,N-myc癌遺伝子のヒトEmbryonal carcinoma(EC)細胞に対する分化誘導抑制作用
ヒトEmbryonal Carcinoma(EC)培養細胞株NEC-14細胞は、分化誘導剤HMBA処理によりin vitroで分化が誘導される。癌遺伝子N-mycの発現はHMBA処理18時間後一過性に低下し24時間後回復する。そこでN-mycをNEC-14細胞にトランスフェクションしN-mycの分化に及ぼす影響について検討した。その結果、外来性N-mycを発現しているクローンではコロニー形成能やヌードマウス移植能が高まり、HMBA処理による細胞表面抗原の変化が明瞭ではなくなり、HMBAによる分化誘導が抑制された。
2,NEC-14の分化過程におけるN-myc遺伝子発現の調節機構
NEC-14細胞におけるN-myc発現の調節機構を調べるために、human N-myc遺伝子をクローニングしたところマウスN-mycと高いhomelogyが認められた。その上流領域への蛋白結合パターンをしらべたところN-myc発現が低下している時期(18時間位)に一致して減少しているDNA-蛋白複合体が見い出された。 更に最近の解析ではN-mycの低下はN-mycプロモーター領域でのE2F複合体形成とよく相関している事実も明らかとなった。
3,ヒトEmbryonal carcinoma細胞(NEC-14)で特異的に発現しているcDNAクローンの分離
未処理NEC-14細胞と16時間HMBA処理したNEC-14細胞を用いcDNAサブトラクション法(oligo(dT)_<30>-latex及びPCRを使用)で、HMBA処理による分化初期段階で重要な役割を担っている遺伝子を分離した。その結果未分化特異的な9クローンを分離出来た。
|
-
[Publications] 木村 博昭,関谷 宗英,他: "多分化能を有するヒトEmbryonal Carcinoma(EC)細胞のHexamethylene Bisacetamide(HMBA)による分化誘導前後における形質発現の変化。" 日産婦誌. 43. 1477-1483 (1991)
-
[Publications] Takuro Hasegawa,et al: "A transient decrease in N-myc expression and its biological role during.differentiation of human embryonal carcinoma cells." Differentiaon. 47. 107-117 (1991)
-
[Publications] Kenji Takehana,et al: "Interaction nuclear factors with the regulatory region of the N-myc gene during differentiation of human embryonal carcinoma cells." Gene. 103. 219-225 (1991)
-
[Publications] Eiji Hara,et al: "Protein phosphorylation required for formation of E2F complexes regulates N-myc transcription duging differentiation of human embryonal carcinoma cells." Oncogene.
-
[Publications] Eiji Hara,et al: "Subtractive cDNA cloning using oligo (dT)_<30>-latex and PCR:isolation of cDNA clones specific to undifferentiated human embryonal carcinoma cells." Nucleic Acids Res.19. 7097-7104 (1991)
-
[Publications] Makoto Kawata,Souei Sekiya,et al: "Neural Rosette Formation within in Vitro Spheroids of a Clonal Human Teratocarcinoma Cell Line,PA-1/NR:Role of Extracellalar Matrix Components in the Morohogenesis" Cancer Res.51. 2655-2669 (1991)
