1992 Fiscal Year Annual Research Report
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04454177
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| Research Institution | Tokyo Metropolitan Institute of Gerontology |
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Principal Investigator |
稲垣 昌樹 東京都老人総合研究所, 神経生理部門, 室長 (30183007)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小河原 緑 東京都老人総合研究所, 神経生理部門, 助手 (60100111)
辻村 邦夫 東京都老人総合研究所, 神経生理部門, 研究員 (10227407)
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| Keywords | 中間径フィラメント / cdc2キナーゼ / suc1蛋白質 / ポリホスホイノシタイド / ポリホスホイノシタイド結合蛋白質 |
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| Research Abstract |
我々が作製した4種のリン酸化中間径フィラメント蛋白質特異抗体で、培養細胞を染色し、細胞周期の進行に伴って生じる中間径フィラメントの構築変化に果たすリン酸化反応の役割を可視化して解析した。並びにそれを遂行するin vivo中間径フィラメントキナーゼの同定を行なった。合わせてポリホスフオイノシタイド結合フィラメント結合蛋白質の同定も行ない以下の知見を得た。1).分裂初期のin vivo中間径フィラメントキナーゼをcdc2キナーゼと同定するとともに、cdc2キナーゼの簡易大量精製法を確立した。本精製法の特色はsuc1カラムからのcdc2キナーゼの特異的溶出剤として0.5MNaclと50%エチレングリコールを含むBufferを用いたことである。2)この精製cdc2キナーゼを用いて種々の中間径フィラメント蛋白質のリン酸化による機能修飾の有無と機能リン酸化部位を同定した。3)cdc2キナーゼは種々の中間径フィラメント蛋白質を化学量論的に有意にリン酸化したが、そのリン酸化はsuc1蛋白質の添加により特異的に阻害された。4)新しい中間径フィラメント結合蛋白質として、αーアクチニンを同定した。αーアクチニンの1部は、細胞内でポリホスホイノシタイド結合蛋白質として、存在することが今回の研究で明らかとなった。このポリホスホイノシタイドーαーアクチニンcomplexはcomplexを形成していないαーアクチニンに比較すると、非常に強いアクチンゲル化活性と、中間径フィラメント結合能を有することも判明した。
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[Publications] Furuhashi,K.,Inagaki,M.et al.: "Phosphorylation by actin kinase of the pointed endーdomain on the actin molecule." The Journal of Biological Chemistry. 267. 9326-9330 (1992)
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[Publications] Matsuoka,Y.,Inagaki,M.et al.: "Two different protein kinases act on a different time schedule as glial filament kinase during mitosis" EMBO Journal. 11. 2895-2902 (1992)
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[Publications] Furuhashi,K.,Inagaki,M.et al.: "Inositol phospholipidsーinduced suppression of Fーactin gelating activity of smooth muscle filamin." Biochem.Biophys.Res.Commun.184. 1261-1265 (1992)
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[Publications] Fukami,K.,Inagaki,M.et al.: "Requirement of phosphatidylinositol 4,5ーbisphosphate for αーactinin function." Nature. 359. 150-152 (1992)
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[Publications] Mitsui,T.,Inagaki,M.et al.: "Purification and characterization of smooth muscle myosinーassociated phosphatase from chicken gizzard." The Journal of Biological Chemistry. 267. 16727-16735 (1992)
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[Publications] Kusubata,M.,Inagaki,M.et al.: "P^<13suc1> suppresses the catalytic function of P^<34cdc2> Kinase for intermediate filament proteins in vitro" The Journal of Biological Chemistry. 267. 20937-20942 (1992)
