1995 Fiscal Year Annual Research Report
カイコの体液キモトリプシンインヒビターの構造と生理機能に関する研究
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05454066
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
藤井 博 九州大学, 農学部, 助教授 (10038268)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
麻生 陽一 九州大学, 農学部, 助教授 (10117054)
河口 豊 九州大学, 農学部, 助教授 (80038306)
古賀 克己 九州大学, 農学部, 教授 (40038261)
土井良 宏 九州大学, 農学部, 教授 (30038210)
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| Keywords | Bombyx mori / CI-1のアミノ酸配列 / キモトリプシンインヒビター / CI-b1のアミノ酸配列 / CI-8塩基配列 / 脂肪組織 |
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| Research Abstract |
(1)キモトリプシンインヒビターの一次構造の決定(藤井・麻生分担): Ict-A複合遺伝子によって発現が支配されている塩基性のキモトリプシンインヒビター(CI-1とCI-b1)を分離精製し、アミノ酸配列を決定した。CI-1およびCI-b1は62個のアミノ酸残基からなり、分子量は7,065であった。アミノ酸配列より得られたアミノ酸組成と、アミノ酸分析結果は一致した。それらのアミノ酸配列を決定した。アミノ酸配列を示すと次のようになる。
CI-1 DKPTTEPICEQAFGNSGPCFAYIKLYSYNQKTKKCEEFIYGGCQGNDNRFITLAECEQKCIK
CI-b1 ・・・・・・K・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・K・・・・・・D・・・・・・・・・・・
(2)キモトリプシンインヒビター遺伝子の構造解析(藤井・土井良分担): CI-8のアミノ酸配列に基づき作成したオリゴヌクレオチドをプライマーに、脂肪組織から作成したcDNAライブラリーを用いたPCR法でCI-8を増幅し、これをプラスミドにクローニングし、DNAの塩基配列を決定した。CI-8の塩基は1,185bp、塩基配列から推定したアミノ酸は395個のからなっていた。活性中心はC末端近くの359-360番目のThr-Serである。既決定のN末端の9個のアミノ酸配列が17番目のPheから35番目のLysまでの配列と完全に一致したことから、CI-8は18番目のPheから以降の379個のアミノ酸からなることが明らかとなった。17番目のアミノ酸より前の16個のアミノ酸はシグナルペプチド配列である。
(3)キモトリプシンインヒビターの生理機能解析(河口・古賀分担):放射能標識したCI-8をカイコに注射し組織の分布を調べたところ、吐糸を開始時の幼虫背面側の脂肪組織に特異的に取り込まれることを明らかにした。
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[Publications] 篠原辰巳: "Genetic analysis of chymotrypsin inhibitor CI-3 and -4 in hemolymph of the silkworm, Bombyx mori." Biosc. Biotec. Biochem.57(7). 1067-1071 (1993)
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[Publications] 白井孝治: "カイコ脂肪体におけるキモトリプシンインヒビター(CI-8)の生合成" 九州蚕糸. 24. 44 (1993)
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[Publications] 白井孝治: "カイコ脂肪体の機能分化に関する一考案" 九州蚕糸. 25. 44 (1994)
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[Publications] Shirai, Koji: "Chymotrypsin inhibitor with oligosaccharide chain from hemolymph of the silkworm, Bombyx mori." Insect Biochem. Molec. Biol. submitted. (1996)
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[Publications] 藤井 博: "カイコ体液キモトリプシンインヒビターの遺伝学的研究" 日蚕雑. (1996)
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[Publications] Shirai, Koji: "Purification and characterization of novel chymotrypsin inhibitor(CI-3)in hemolymph of the silkworm, Bombyx mori." Insect Biochem. Molec. Biol.submitted. (1996)
