アデノウイルス・ベクターを用いた筋ジストロフィーの遺伝子治療に関する基礎的研究

1993 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 05454264
• Research Institution: National Center of Neurology and Psychiatry
• Principal Investigator: 杉田 秀夫 国立精神・神経センター, 総長 (80009951)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 武田 伸一 神経研究所, 疾病研究第一部, 室長 (90171644) ; 塚原 俊文 神経研究所, 疾病研究第一部, 研究員 (60207339) ; 荒畑 喜一 神経研究所, 疾病研究第一部, 部長 (30053325)
• Keywords: 進行性筋ジストロフィー / アデノウイルス・ベクター / 遺伝子治療 / beta‐galactosidase(lacZ)遺伝子 / ジストロフィン遺伝子 / ミオシンH鎖IIBプロモーター / 正荷電リポソーム

Research Abstract

アデノウイルス・ベクターを用いた進行性筋ジストロフィーに対する遺伝子治療の基礎的研究を行うことを目的として,今年度は生化学的にも形態学的にも検出することが可能な、beta‐galactosidase(lacZ)遺伝子のアデノウイルスゲノムへの組み込みを行った。
1.骨格筋と心筋に特異的なミオシンH鎖IIBプロモーターとbeta‐galactosidase(lacZ)遺伝子からなるユニットを作製した。
2.同ユニットを、アデノウイルスゲノムのうちE1A,E1B,E3を欠失したコスミドカセットに組み込み,発現コスミドカセットとした。
3.現在、斎藤らの方法に従って、アデノウイルスゲノム末端蛋白複合体と、発現コスミドカセットを293細胞に導入し、組み替えアデノウイルスを得る実験を行っている。
今年度中に組み替えアデノウイルスが得られれば、引続きマウス筋芽・筋管細胞系C2、マウス骨格筋およびマウス個体に導入し、アデノウイルスベクターの有効性と,ミオシンH鎖IIBプロモーターの特異性を検定する予定である。両者の確認を前提に、lacZ遺伝子の代わりに、ジストロフィン遺伝子の組み替えを考えている。
一方、本研究と平行して、ウイルスベクターを使用しない遺伝子導入法についても研究を行った。今年度は、正荷電リポソームとりわけ、DOSPA/DOPEとDOGSを用いることにより、マウス筋芽・筋管細胞系C2および、マウス線維芽細胞系10T1/2に対する効率の良い遺伝子導入法を確立することができた。現在この方法を用いて、マウス個体に対する遺伝子導入を行っている。

Research Products

• [Publications] Yoshida,K.et al.: "Molecular analysis of the Duchenne musclar dystrophy gene..." Muscle&Nerve. 16. 1161-1166 (1993)
• [Publications] Arahata,K.et al.: "Laminin in animal models for muscular dystrophy,Defect of..." Proc.Japan Acad.69,B. 259-264 (1993)
• [Publications] Takeda,S.et al.: "Mutations in the DMD gene and cardiomyopathy in Becker..." Neuromuscular Disorders. (in press).
• [Publications] 武田伸一,他: "筋の発生に関与する遺伝子" 最新医学. 48. 493-499 (1993)
• [Publications] 武田伸一,他: "筋ジストロフィー(DMD,BMD)" Brain Nursing. 9. 731-736 (1993)
• [Publications] 武田伸一(分担執筆): "Annual Review神経 1994" 中外医学社, 370 (1994)
• [Publications] 中尾洋子、他(分担執筆): "遺伝子診断" 羊土社, 190 (1993)