温熱感受性リポソームを用いた臓器選択的遺伝子導入法による癌治療の基礎的研究

1993 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 05671341
• Research Institution: Tokyo Women's Medical University
• Principal Investigator: 木原 健 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (60195344)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 東間 紘 東京女子医科大学, 医学部・泌尿器科, 教授 (90075549) ; 伊藤 文夫 東京女子医科大学, 医学部・泌尿器科, 助手 (20211683)
• Keywords: DNAトランスフェクション / 温熱感受性リポソーム / sendai virus

Research Abstract

<方法>
1.sendai virus融合DNA含有温熱感受性リポソーム(SDTリポソーム)の作製。DPPC、DSPCを重量比9:1で混合したリポソームを作製し相転移温度、リポソーム粒子径を観察、封入遺伝子にpmiwzを用い、リポソームに封入させた後sendai virusをリポソーム表面に融合しSDTリポソームを作製した。
2.ヒト正常尿細管上皮株LLCPK‐I、腎細胞瘻株ACHNを継代培養し以下の方法にてpmiwzのtransfectionを試みた。A.リポソーム法、B.リン酸Ca共沈法。DNA transfectionを確認するためpmiwzの産生するガラクトシダーゼの発現を観察した。
<結果>
1.DPPC DSPC9:1のLUVは相転移温度40〜41℃、粒子径200〜300mmでありpmiwz封入効率も15%と良好であった。DNA封入、Sendai virus融合後も相転移温度に変化は認められず、当初目的としたリポソームができた。
2.従来の直接的なtransfection methodであるBではLLCPK‐I、ACHNともにガラクトラダーゼの発現が認められた。本実験の目的であるAにおいてはリポソームあたりの遺伝子封入率を増加させるとBと同様にガラクトシターゼの発現が観察できた。ガラクトシダーゼの確認にはxgal、抗betaガラクトシダーゼ抗体を用いた蛋白発現を観察しさらにsouthern blotおよびNorthan blot法を用いてDNA、RNAの確認も行った。