1995 Fiscal Year Annual Research Report
緑膿菌の抗生物質排出ポンプの遺伝子発現と蛋白質解析
Project/Area Number |
07457073
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Research Category |
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
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Research Institution | Tokai University |
Principal Investigator |
中江 太治 東海大学, 医学部, 教授 (50102851)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
米山 裕 東海大学, 医学部, 助手 (10220774)
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Keywords | 緑膿菌 / Pseudomonas / 抗生物質 / 薬剤排出 / 排出ポンプ / 薬剤耐性 |
Research Abstract |
免疫力の低下した患者に感染を起こす緑膿菌は多くの異なった抗生物質に対して耐性である。そのメカニズムの一つとして最近、特に重視されているのは緑膿菌における薬剤の低い透過性と細胞内に達した薬剤の能動的排出の連係作用である。本研究では特に後者に重点を置いた研究を行った。我々は既に緑膿菌の排出ポンプをコードするmexA-mexB-oprM遺伝子をクローン化することに成功している。そこでこのクローンmexA-mexB-oprMの遺伝子の一部をプローブとして種々の緑膿菌においてこの耐性遺伝子がどのように発現されているかをノーザンプロット法を用いたmRNAの検定をすることによって調べた。その結果次のようなことが明らかとなった。(1)我々が最初に分離した薬剤排出の亢進した菌TNP051/058、ロ-ザン大学で分離されたnalB変異株、更には国内で分離されたOCR1株など多剤耐性株ではいずれもmexオペロンの発現が亢進していた。(2)ノルフロサキシン耐性菌として分離されたnfxB及びnfxC株ではいずれもmexオペロンの発現は野生株のそれと同等であった。(3)野生株においてもある程度のmexオペロンの発現が見出された。このようにmRNAレベルでのmex遺伝子の発現が確認されたので、次にこれらにコードされる蛋白質の検定を行った。その結果mexオペロンの発現が亢進している菌では41Kの内膜蛋白(多分mexAにコードされる蛋白質)及び51Kの外膜蛋白質の(oprMにコードされる蛋白質)の過剰発現が確認された。しかしながらmexB産物ははっきりとした確認はできなかった。
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[Publications] Morshed, S. R. M. et al: "Expression of genes associated with antibiotic extrusion in Pseudomonas aeruginosa" Biochem. Biophys. Res. Commun.210. 356-362 (1995)
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[Publications] Yoneyama, H. et al: "Role of porins in the antibiotic susceptibility of Pseudomonas aeruginosa: construction of mutants with deletions in the multiple orin genes" Biochem. Biophys. Res. Commun.213. 88-95 (1995)
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[Publications] Satake, S & Nakae, T.: "Outer membrane permeability of β-lactamase inhibitors in Pseudomonas aeruginosa" FEMS Microbiol. Letts.129. 251-254 (1995)
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[Publications] Nakae, T.: "Role of membrane permeability in determining antibiotic resistance in Pseudomonas aeruginosa" Microbiol. Immunol.39. 221-229 (1995)
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[Publications] Ishii, J & Nakae, T.: "Specific interaction of the protein of Pseudomonas aerujginosa with antibiotics" FEMS Microbiol. Letts.(in press). (1996)
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[Publications] 中江太治: "外膜透過性及び内膜における薬剤排出" 臨床と微生物. 22. 529-534 (1995)