単純ヘルペスウイルスの皮膚における感染様式と調節因子の解明

1995 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 07670956
• Research Category: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• Research Institution: Sapporo Medical University
• Principal Investigator: 三浦 俊祐 札幌医科大学, 医学部, 助手 (50244364)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 藤井 暢弘 札幌医科大学, 医学部, 教授 (90133719)
• Keywords: 単純ヘルペスウイルス / HSV / 持続感染 / インターフェロン / アポトーシス / 皮膚感染 / HSC-1細胞 / 皮膚角化細胞

Research Abstract

1)in vitroにおける持続感染系の確立
皮膚角化細胞(扁平上皮癌)由来のHSC-1細胞に、HSV1型(HSV-PH株)を用い、低いm.o.l.で感染させた。感染効率m.o.l.=10^<-6>の場合には、ほぼconfluentに達するまでCPEを示さず、継代可能となり、6週目(第9代)に達した時、抗HSV-1抗体を用いた蛍光抗体法で、少数のやや大型の細胞の核、細胞質に蛍光を認めた。よって、6週目でも少数の細胞でのHSV蛋白の産生が示されたが、7週目に細胞よりDNAを抽出し、HSV特異塩基配列の一部をprimerとしてPCRを行うと陰性であった。以上より継代中に細胞中よりHSV(DNA)が失われたか、感染細胞が除去されたと考えられた。現在、a)感染細胞の動向を経時的に調べる、b)mRNAレベルでの発現を調べる、c)蛍光抗体法で確認された少数の感染細胞のcloningを行い、持続感染系の確立を目指す、などを検討中である。
2)HSV感染細胞に対するα-IFNの影響
1×10^5個/mlのFL、HSC-1細胞を蒔いた翌日に種々の濃度のα-IFNを加え、その翌日、ウイルス(HSV,VSV,Sindvis virus)を感染させた。FL細胞におけるα-IFNの抗ウイルス効果はHSV,Sindvis virus感染に対しては認められなかったが、VSV感染は抑制された。また、α-IFNはHSC-1をHSV感染から防御できず、,VSV、Sindvis virusに対しては濃度依存性に防御した。次に、1)で作成した「持続」感染HSC-1細胞の、α-IFNへの感受性を調べた。非感染HSC-1細胞は10^4u/mlのα-IFN存在下でも傷害を受けなかったが、「持続」感染細胞は2.5×10^3u/mlにおいて、著明な傷害を受けた。以上の結果よりα-IFNがHSV-1感染細胞にはむしろ傷害的に作用する場合がある事が示唆され、生体からのウイルス排除のためにα-IFNが感染細胞にapoptosisを引き起こすのではないかという可能性を検討中である。