1998 Fiscal Year Annual Research Report
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08458219
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
滝澤 温彦 大阪大学, 大学院・理学研究科, 助教授 (60154944)
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| Keywords | MCMタンパク質 / クロマチン結合蛋白質 / DNA複製 / Cdc45タンパク質 |
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| Research Abstract |
MCM、ORCタンパク質と相互作用するクロマチン結合タンパク質の探索
MCMと相互作用することが遺伝学的な研究から明らかにされている、出芽酵母Cdc45のアフリカツメガエルホモログに対する抗体を用いてアフリカツメガエル卵抽出液のタンパク質を免疫沈殿したところ、MCMではなくDNAポリメラーゼαと共沈降する事を見いだした。抗ORC抗体を用いた同様な実験では共沈降するタンパク質を同定できなかった。また、MCMタンパク質を用いたファーウエスタン法で、ヒストンH3がMCM3と相互作用することを見いだした。
DNA複製開始に関わるクロマチン結合タンパク質の精製と、その機能の検索
卵抽出液から抗体を用いて調整した6種類のメンバーからなるMCM複合体には顕著なNTPase活性を検出できなかった。また、DNAの添加によっても活性は上昇しなかった。ORC、Cdc6タンパク質に関しては抗体力ラムによる精製を試みている。
DNA複製開始に関わるクロマチン構造の検出
卵抽出液にプラスミドを加えても効率よく染色体構造を形成させることが出来なかったので、卵抽出液に精子核より調整した染色体DNAを加えて、DNA複製開始反応が起こる核形成後の変化を種々の抗体を用いて調べた。その結果、XCdc45のクロマチンへの結合は核形成後に初めて起こること、またこの結合が複製開始に必須であることがわかった。
DNA複製の進行あるいは終了時のクロマチン構造形成に関わる因子の探索
卵抽出液を用いて複製反応が進行しているクロマチンを調整しクロマチン結合タンパク質を調べたところPCNAやRPAなどの複製反応に必要なタンパク質がDNAポリメラーゼαの活性を阻害した条件でクロマチン上に結合することがわかった。
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Research Products
(3 results)
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[Publications] Ohno,K.: "cDNA cloning and expression during development of Drosophila melanogaster MCM3,MCM6 and MCM7." Gene. 217. 177-186 (1998)
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[Publications] Mimura,S: "Xenopus Cdc45-dependent loading of DNA polymerase αonto chromatin under the control of S-phase cdk." EMBO J.17,. 17. 5699-5707 (1998)
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[Publications] 滝澤温彦: "MCM/P1ファミリー蛋白質とDNA複製のライセンス化" 実験医学. 16巻8号. 61-66 (1998)
