1998 Fiscal Year Annual Research Report
臨床診断応用へのin situハイブリダイゼーションシステムの開発
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08557020
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
野村 慎太郎 大阪大学, 医学部, 助教授 (80159087)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
北條 昭次 (株)サクラ精機, 開発部病理学研究室, 室長
北村 幸彦 大阪大学, 医学部, 教授 (70028520)
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| Keywords | ジゴキシゲニン / ウィルス / in situハイブリダイゼーション / ケニルミネッセンス / mRNA / DNA / ハイブリダイゼーション / 病理診断 |
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| Research Abstract |
全自動in situハイブリダイゼーションシステムの開発と実用化を目的とし、すでに開発されている全自動染色装置と全自動免疫染色装置の有効性について検討を行ったところ、良好な結果を得た。これまではウイルスDNAの検出を主に行っていたが、改良を加えることによって、mRNAが効率よく検出されることも確認した。さらに最近開発されたチラミド増感法がin situハイブリダイゼーションに有効であるかどうかを検討したところ、従来の方法に比べて50倍高い感度で核酸を検出することができた。われわれはこのシステムの有効性について実際の病理標本を用いて検討した。迅速病理診断用手術材料標本を用いて、癌遺伝子の増幅の有無を検討した。その結果、胃癌標本においてその30%にSam-1遺伝子の増幅を認めた。この結果はサザーンハイブリダイゼーション法などによりすでに報告されている値(40%)にきわめて近く、診断の有効性を示す結果であると考えられる。また、病理解剖標本からも同様に癌遺伝子の増幅を検出する試みを行ったが、この場合の検出効率は10%前後にとどまり、長期間にわたる固定などの操作によって、細胞内のDNAが分解されたか、あるいは過度のクロスリンクを生じたかであろうと考えた。また、現在、市販されている全自動染色装置と全自動免疫染色装置をin situハイブリダイゼーションに利用するためには、特殊なプログラムを導入する必要が生じたので、これをあらかじめ機器にプログラムすることをおこなった。また、高温で機器を運転するために生じる誤差についても検討を行い、耐熱性を有する材質の利用が有効であるとの結果を得た。
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[Publications] M.Sato,S.Nomura,et al: "Transcriptional regulation of osteoportor gene in vivo by PFFP2αA/cRFA 1 and Tets1 in the skeletal tissues" Oncogene. 17. 1517-1525 (1998)
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[Publications] S.Ohshima,S.Nomura et al: "Ic-b playsas a key role in the development antigen-induced arthikinacing" Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. 95. 8222-8226 (1998)
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[Publications] A.Suzuki,S.Nomura et al: "Localization of mRNA for trkB isoforms and p75 inthermal retinal geogliometlle" J.of Neurosci.Res. 54. 27-37 (1998)
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[Publications] T.Kosaka,S.Nomura et al: "Differential localization and expression of α and isoenzymes of protein kinase c in the rat retimes" J.of Neurosci.Res. 54. 655-663 (1998)
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[Publications] M.Onoda,S.Nomura et al: "Maturational disturbance of chometrocytes in CBfa-1-deficient using" Dev.Dynanics. 印刷中.
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[Publications] K.Terai,S.Nomura et al: "The role of osteopositin in the Kinase sensedeling caused by mechanical stress" T.of Bone and Mineral Res. 印刷中.
