低Ca食飼育ウサギ血清を用いた破歯細胞培養と乳歯歯根吸収に関する研究

1996 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 08672404
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Research Institution: Fukuoka Dental College
• Principal Investigator: 小笠原 靖 福岡歯科大学, 歯学部, 助手 (60160735)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 久保山 博子 福岡歯科大学, 歯学部, 講師 (10258593)
• Keywords: 低Ca食 / 血清 / 破歯細胞 / 培養 / 乳歯歯根吸収

Research Abstract

破骨細胞の培養法は,まだ完全に確立されておらず,培養には種々の因子の添加と血清のロットチェックが必要とされている。西田らは低Ca食飼育ウサギ血清は血清のロットチェックの必要がなく,これまでに報告されている因子を添加することなく使用でき,破骨細胞の食骨機能を維持した培養が可能であったと報告している。よって同血清を用いれば,破骨細胞に類似した破歯細胞培養にとっても有効であろうと考え,実験を行った。
1.研究目的
平成8年度の研究目的は低Ca食飼育ウサギ血清を用いてヒト乳歯歯根吸収部から採取した破歯細胞の培養を行ない,同血清が破歯細胞培養にとって常に有効であることを確認することであった。
2.研究方法
(1)ウサギ体重約1.5kgを低Ca食で4週間飼育後,全採血して血清分離し,低Ca食飼育ウサギ血清を採取した。
(2)精密低速切断機を用いてウシ大腿骨より3.5×3.5×0.2mmの骨片を作製した。
(3)当小児歯科外来で抜歯の適応と診断され,抜去された新鮮な乳歯の根吸収面より破歯細胞を採取した。
(4)ウシ骨片および低Ca食飼育ウサギ血清を入れたmulti well plateに採取した破歯細胞を入れ,5%CO_2,37℃インキュベータ-中で培養。培養期間は1日,2日,3日,5日,7日,10日とし,それぞれの培養期間を経た骨片についてTRAP染色および光顕観察し,Scheffeの分散分析を行った。
(5)10%次亜塩素酸ナトリウムで骨片上の細胞を除去した後,通法によりSEM試料を作成し,観察した。
3.結果
100%低Ca食飼育ウサギ血清のみを用いて抜歯直後のヒト乳歯歯根吸収面から採取した細胞の培養を行った結果,TRAP陽性多核細胞の増加が見られた。さらにウシ骨片上に吸収窩も観察された。よって培養細胞は破歯細胞と思われ,この培養系により,ヒト破歯細胞の培養が容易となった。