Bリンパ球の細胞死および増殖の制御におけるCDKインヒビターの機能の解析

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09044292
• Research Institution: Tokyo Medical and Dental University
• Principal Investigator: 鍔田 武志 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 教授 (80197756)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): RETH Michael マックス, プランク研究所, 教授 ; RAJEWSKY Kla ケルン大学, 遺伝研, 教授 ; HOWARD Maure DNAX研究所, 部長 ; 安達 貴弘 名古屋大学, 農学研究科, 助手 (50222625) ; 上阪 等 東京医科歯科大学, 医学部, 助手 (00251554)
• Keywords: Bリンパ球 / 細胞死 / 増殖 / p21 / p27 / Cdkインヒビター / 抗原受容体 / c-Myc

Research Abstract

我々は、正常マウス成熟B細胞におけるCDKインヒビターの発現を検索し、静止期B細胞ではp21の発現レベルは低いがp27のレベルは高く、また、p27のレベルはB細胞抗原受容体(BCR)を介するシグナルでは変化しないが抗CD40抗体処理により著明に低下することを明かにし、p27が正常B細胞のアポトーシスや増殖の制御に重要な役割を果していることが示唆された。
B細胞株WEHIー231ではBCRを介する細胞周期停止とアポトーシスに伴いp27の発現が増強するとともにc-Mycの発現が増強する。p27の上昇を伴う他の細胞系のアポトーシスの多くはc-MYcの発現により増強される。c-MYcの発現プラスミドを導入したWEHIー231細胞ではBCRを介するアポトーシスに耐性であることが報告されたが、我々はc-MYcを誘導的に発現する系を用いてより正確にc-MYcの過剰発現によるアポトーシスへの影響を検討し、c-Mycの発現によりBCRを介するアポトーシスが著明に増強することを明かにした。したがって、p27の機能発現においてc-Mycが何らかの役割を果すことが示唆される。
さらに、我々は、BCRに会合するLyn,Sykといったチロシンキナーゼあるいはその基質PLCγ2を欠損するトリB細胞株を用いて、BCR架橋によるc-mycの転写誘導にはSykおよびPLCγ2が必須であることを示した。Lynはこれに必要でなく、むしろ抑制的に作用していることを見出した。このLynによるBCRシグナル制御機構はB細胞応答の閾値設定に重要で、非特異抗原に対するB細胞反応を抑制するのに寄与していると考えられ、同時にc-mycの発現誘導がB細胞応答の鍵となることも示唆された。今後も誘導性c-myc遺伝子欠損マウスの作製を進めていく。

Research Products

• [Publications] Han, H.: "Involvement of the cyclin-dependent kinase inhibitor p27^<Kip1> in negative signaling through the antigen-receptor of B lymphocytes." Leukemia. 11(Supp 3). 367-369 (1997)
• [Publications] Tsubata, T.: "Apoptosis of mature B cells." Int. Rev. Immunol.(in press). (1998)
• [Publications] Watanabe, N.: "Antigen receptor cross-linking by anti-immunoglobulin antibodies coupled to cell surface membrane induces rapid apoptosis of normal spleen B cells." Scand. J. Immunol.(in press). (1998)
• [Publications] Katsuta, H.: "Lyn-mediated down-regulation of B-cell antigen receptor signaling: inhibition of protein kinase C activation by Lyn in a kinase-independent fashion." J. Immunol.160. 1547-1551 (1998)
• [Publications] Akashi, T.: "Direct evidence for the contribution of B cells to the progression of insulitis and the development of diabetes in non-obese diabetic mice." Int. Immunol.9. 1159-1164 (1997)
• [Publications] Yamanashi, Y.: "Role of tyrosine phosphorylation of HS1 in B cell antigen receptor-mediated apoptosis." J. Exp. Med.185. 1387-1392 (1997)
• [Publications] Suzuki, Y.: "HAX-1, a novel intracellular protein, localized onmitochondria, directly associates with HS1, a substrate of Src family tyrosine kinases." J. Immunol.158. 2736-2744 (1997)
• [Publications] Tsubata, T.: "Kinases and Phosphatases in Lymphocyte and Neuronal Signaling" Springer-Verlag, 368 (1997)