テンサイにおける殺虫性外来遺伝子の発現効率の高い新システム開発に関する基盤研究

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09460001
• Research Institution: Hokkaido University
• Principal Investigator: 島本 義也 北海道大学, 農学部, 教授 (00001438)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 金澤 章 北海道大学, 農学部, 助手 (30281794) ; 浅野 真一郎 北海道大学, 農学部, 助手 (60222585) ; 佐野 芳雄 北海道大学, 農学部, 教授 (70109528)
• Keywords: テンサイ / 形質転換 / 殺虫性 / BT遺伝子 / 葉緑体 / 転移酵素 / アグロバクテリウム / ヨトウ

Research Abstract

1) テンサイの葉緑体形質転換系の開発
相互組み合わせを利用したテンサイ葉緑体形質転換系を開発するために、テンサイのrbcLrやRNA16Aの近傍の塩基配列をサブクローニングし、選抜因子(aadA)、標識(GUS)、プローモーター(rrnまたはpsbA)、ターミネーター(rps16)を組込んだプラスミドを構築した。このプラスミドをパーティクルガンを用いてテンサイのシュート基盤組織に打ち込み、再分化個体を得るべく、培養中である。
2) テンサイオルガネラへのタンパク質局在化システムの開発
葉緑体およびミトコンドリアへの輸送ペプチドをコードする塩基配列をタバコよりPCR増幅よって得られた。この配列をGUS遺伝子配列上でタンパク質のN末端をコードする位置に連結させ、CaMV35Sプロモーターによって発現するプラスミドをアグロバクテリウムを用いてテンサイのシュート基盤組織に導入した。現在、導入個体を培養中である。
3) 形質転換体テンサイにおけるcry遺伝子の発現
cry遺伝子導入に成功したテンサイ個体から最新成熟葉および成熟葉の葉片をサンプルし、ヨトウガ幼虫に供与し、産生タンパクの毒性を評価した。その結果、最新成熟葉を供与した区では、ヨトウガ幼虫の成長がほとんど観察されず、cry遺伝子は最も生長の盛んな器官で多く発現していることがわかった。
4) テンサイのヨトウガ幼虫の殺虫に一層有効なcry遺伝子のスクリーニング
ヨトウガ幼虫に特異なICPを産生するcry遺伝子を大腸菌に組み込み、ICPを生産させた。ヨトウガ幼虫を飼い、より毒性の強い有効なCry遺伝子菌株をスクリーニングした。