1998 Fiscal Year Annual Research Report
脳腱黄色腫症(CTX)の小脳における神経細胞死のメカニズム
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09470039
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
脊山 洋右 東京大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (90010082)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
内島 泰信 東京大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (90272426)
加納 和孝 東京大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (70111507)
久保田 俊一郎 東京大学, 大学院・医学系研究科, 助教授 (00260480)
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| Keywords | 脳腱黄色腫症 / 小脳神経細胞 / アポトーシス / コレスタノール / 角膜内皮細胞 / 水晶体上皮細胞 |
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| Research Abstract |
脳腱黄色腫症(CTX)はステロール27位水酸化酵素の障害による先天性の脂質代謝異常症で、血清コレスタノール値が上昇し、臆(特にアキレス腱)および神経系の黄色腫、小脳症状、錐体路症状、若年性白内障、痴呆などの症状が現れる。CTX患者の小脳症状、眼症状の機構解明を本研究の目的とした。コレスタノールが小脳(特にプルキンエ細胞)、角膜内皮細胞・水晶体上皮細胞の細胞死(アポトーシス)を起こすとの仮説をたて、これを実証する実験を行った。
(方法)ラットの小脳細胞、ウシ角膜内皮細胞・水晶体上皮細胞を各々初代培養を行った。1,10μg/mlコレステロール添加群、1,l0μg/mlコレスタノール添加群、1%エタノール添加群(コントロール群)に分けて培養を続けた。各群の細胞内脂質濃度はHPLC法で測定した。細胞の生存率はトリパンブルー法で測定した。細胞をTUNEL法で蛍光染色し、ACAS570レーザーサイトメーターでアポトーシス誘導を解析した。アポトーシス誘導の際のICE,CPP32、protease活性も測定した。
(結果)コレスタノール濃度は,小脳細胞,角膜内皮細胞,水晶体上皮細胞で、10μg/mlコレスタノール添加群でコントロール群に比べ有意に上昇した.また、細胞生存率が減少した。TUNEL法による解析で、小脳細胞,角膜内皮細胞、水晶体上皮細胞ともに10μg/mlコレスタノール添加群の核に強い蛍光が認められアポトーシスが誘導されていると考えられた。角膜内皮細胞、水晶体上皮細胞ともに時間依存的にICE,CPP32 protease活性が10μg/mlコレスタノール添加群でコントロール群に比べ有意に上昇していた。以上の結果は上記の仮説を実証し、CTX患者の小脳症状、眼症状の機構解明に寄与する研究成果をあげた。
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[Publications] 脊山洋右: "Genetic analysis enables definite and rapid diagnosis of cerebrotendinous xanthomatosis" NEUROLOGY. 51. 865-867 (1998)
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[Publications] 脊山洋右: "A Novel Arg^<(6)> Ser Mutation in the Sterol 27-Hydroxylase Gene(CY27)" Biochemistry. 37(43). 15050-15056 (1998)
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[Publications] 脊山洋右: "Silent Nucleotide Substitution in the Sterol 27-Hydroxylase Gene(CYP27)Leads to Altealtemative Pre-mRNA Splicing by Activating a Cryptic 5 Splice Site at the Mutant Code in Cerebrotendinous Xanhtomatosis Patients" Biochemistry. 37(13). 4220-4428 (1998)
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[Publications] 脊山洋右: "Altemative pre-mRNA splicing of the sterol 27-hydroxylase gene(CYP27)caused by a G to A mutation at the last nucleotide of exon 6 in a patient with cerebrotendinous xanthomatosis(CTX)" Journal of Lipid Research. 39. 509-517 (1998)
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[Publications] 脊山洋右: "脳腱黄色腫症:コレスタノールにより誘導される小脳プルキンエ細胞・水晶体上皮細胞のアポトーシス" The Lipid. 9(4). 300-305 (1998)
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[Publications] 脊山洋右: "Cholestanol induces apoptosis of cerebellar neuronal cells in vitro" Biochem Biophys Res Commun. (印刷中). (1999)
