インフルエンザウイルスゲノムRNA分節のパッケージング調節とNS2蛋白の機能

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09670318
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Research Institution: Kanazawa Medical University
• Principal Investigator: 小田切 孝人 金沢医科大学, 医学部, 助教授 (80177237)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 中田 進 山之内製薬, 分子医学研究所, 主管研究員 (90129255)
• Keywords: インフルエンザウイルス / ゲノムRNA構造 / RNA分子識別 / CATアッセイ / インフルエンザDI RNA

Research Abstract

本研究の目的は、ウイルス粒子形成過程におけるゲノムRNA分節の集合機構とパッケージング機序を解明することにある。そこで平成9年度においては、RNA分節の集合機構を明らかにするために、各RNA分節はそれぞれ識別可能であるのか、さらに各RNA分子上には識別シグナルが存在するのかなどについて解析した。
本研究では、株化細胞#76にDIウイルス粒子からクローニングしたPAまたはPB2ポリメラーゼ遺伝子由来のDI-RNA(PADI-RAN,PB2DI-RNA)およびそれと同一の非コード領域を持つ組み換え体CAT-RNA(PA/CAT,PB2/CAT)を同時に導入すると、組み換え体CAT-RNAのCAT発現が特異的に抑制されるという性質を利用した。このことは、DI-RNAの標的となる領域は、組み換え体CAT-RNAの非コード領域内に存在することを示している。そこで、この領域を同定するために、PA、PB2それぞれの非コード領域の5〜7塩基を連続的に互いに置換したキメラ型非コード領域を持つCAT-RNAを作成し、PB2DI-RNAによってCAT発現の抑制を受ける非コード領域の構造を解析した。
その結果、組み換えCAT-RNAの3'末端の13-19番目の塩基配列がPB2遺伝子由来であるとPB2DI-RNAによって特異的に抑制され、逆に、この領域がPA遺伝子由来であると抑制は全く起こらないことが分かった。次に、DI-RNA分子上の抑制領域を同定するために、3'および5'非コード領域に種々の欠損変異を導入した。その結果、3'13-19番目の塩基を欠落させたDI-RNAは、標的となるCAT-RNAの発現を全く抑制しなかった。
以上の成績から、ウイルスゲノムRNA分節は各分節ごとに識別可能であること、さらにその識別シグナルは、3'端の7塩基であることが明らかになった。

Research Products

• [Publications] T.Odagiri & M.Tashiro: "Segment-specific noncoding sequences of the influenza virus……" Journal of Virology. 71,No3. 2138-2145 (1997)
• [Publications] 小田切 孝人: "インフルエンザウイルスゲノムRNA分節特異的非コード領域の機能" 日本臨床. 55,No10. 2547-2554 (1997)