IL-8産生とIL-8によるサイトメガロウイルス複製に関する分子制御機構の解析

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09670320
• Research Institution: Kanazawa Medical University
• Principal Investigator: 村山 次哉 金沢医科大学, 医学部, 助教授 (60159184)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 小渕 正次 金沢医科大学, 医学部, 助手 (70257450)
• Keywords: サイトメガロウイルス / IL-8 / ルシフェラーゼ発現ベクター / 免疫染色 / U373MG細胞 / 遺伝子導入

Research Abstract

今年度は、昨年度に継続して"IL-8産生に関わるCMV遺伝子の解析"に関する研究を行った。これまでの一時発現系を利用した遺伝子導入実験による解析から、IL-8遺伝子発現およびタンパク産生に関与するCMV遺伝子は、少なくともその一部は前初期遺伝子(IEl,IE2)領域のIEl部位である可能性を報告してきた。今年度の研究ではこのことを更に明確にする為に、IEl,IE2遺伝子鎖域を含む種々のパーマネント細胞系を樹立し検討した結果、以下の成績が得られた。
CMVのIEl,IE2遺伝子領域をpSV2-neoベクターに構築したものを、Astrocytoma由来のCMV弱許容細胞(U373MG)に遺伝子導入し、G418Sulfateを含む選択培地を用い各種パーマネント細胞株を得た。これらの細胞培養液中のIL-8タンパク量を測定したところ、IEl導入細胞株が最大であった。また、IL-8遺伝子上流域の各種転写部位を有するルシフェラーゼ発現ベクターをこれらの細胞へ遺伝子導入し、ルシフェラーゼ活性の誘導を標的に比較検討したところ、IEl導入パーマネント細胞株がIL-8遺伝子発現に関与しており、特にNF-kBとAP-1転写活性部位を特異的に活性化することが示唆された。さらにImmunostainingによる二重染色による観察から、同じ細胞にIEl抗原とIL-8抗原を同時に発現しているのが見い出された。この事は、CMVのIEl遺伝子発現細胞がNF-kBとAP-1の活性化を介して、IL-8をも産生することを示したことになる。これらの事から、一時発現系を利用した昨年の結果と同様にIL-8産生に関与するCMV遺伝子は、少なくともIEl部位であることが再確認された。以上の知見は、第13回ヘルペスウイルス研究会(富山)、第35回日本細菌学会中部支部総会(名古屋)および第46回日本ウイルス学会総会(東京)において発表された。

Research Products

• [Publications] T.Murayama et al.: "Potential involvement of IL-8 in the pathogenesis of ………" J.Leukoc.Biol.64. 62-67 (1998)
• [Publications] H.Sadanari et al.: "The effect of cyclic AMP on expression of the major ………" Arch.Virol.144. (1999)
• [Publications] 村山次哉: "ヘルペスウイルスとケモカイン" 血液・免疫・腫瘍. 3. 91-95 (1998)
• [Publications] 向田直史、村山次哉: "インターロイキン8の遺伝子発現調節機構" 臨床病理. 46. 821-828 (1998)
• [Publications] 向田直史、村山次哉: "Biodefence シリーズ3、異物認識と生体反応-新しい視点を求めて-" 日本生体防御学会、岡田秀親編集、菜根出版刊, 332 (1998)