1997 Fiscal Year Annual Research Report
婦人科領域悪性腫瘍におけるDNAコピー数異常とその臨床病理学的意義
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09771317
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Research Institution | Sasaki Institute |
Principal Investigator |
岩渕 浩之 (財)佐々木研究所, 婦人科, 研究員 (50223417)
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Keywords | CGH / プローブ標識率 |
Research Abstract |
パラフィン包埋切片を用いたCGH法について DNAは20%緩衝ホルマリン固定パラフィン包埋切片(10μm)20から30枚をキシレンにより脱パラフィン処理し,25mlのPK(20mg/ml)を加えたdigestion bufferを用い55℃でincubation(適宜Pkを追加)を行い、PCI法を用いてDNAを抽出し,エタノール沈殿法により回収した.回収されたDNAは新鮮標本より抽出されたものに比べfragment sizeは短いものの,CGH解析においてはNick-translationの条件をコントロールすることにより新鮮標本を用いた場合と同等のクオリティのデータを得ることが可能であった. プローブの標識率の検討について 5μ1のプローブに対し、Sephadex G-50 spin colum を用いて非標識ヌクレオチドを除いた後,10ngのDAPIを加えddH_2O又は1mM Tris-HCI(pH7.0)にて総量1mlとして,下記の如く蛍光強度を測定する. for DAPI:excitation at360nm,emission at 472nm for FITC:excitation at483nm,emission at 524nm for Texas Red:excitation at580nm,emission at 630nm それぞれFITC intensity/DAPI intensity(F/D ratio),Texas Red intensity/DAPI intensity(T/D ratio)を算出し,検討を加えたところF/D ratio>4.0,T/D ratio>2.0を示すプローブがCGH解析に適した標識率であることが確認できた.
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Research Products
(2 results)
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[Publications] 岩渕浩之他: "CGH(Couparatie geuouic hybridizatiu)法による染色体異常検出" 組織培養工学. 23(5). 154-159 (1997)
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[Publications] 岩渕浩之他: " 庭性のう腫腺癌の組織学的分化度と遺伝子コピー数異常(CNAs)についての検討" 日本婦人科病理ユルポスコピー学会雑誌. 15(2). 171-177 (1997)