1998 Fiscal Year Annual Research Report
細胞増殖とシグナル伝達による中間径フィラメント制御機構の解明
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10480205
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Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | Aichi Cancer Center Research Institute |
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Principal Investigator |
稲垣 昌樹 愛知県がんセンター, 生化学部, 部長 (30183007)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
伊奈田 宏康 愛知県がんセンター, 生化学部, 研究員 (90283522)
永田 浩一 愛知県がんセンター, 生化学部, 室長 (50252143)
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| Keywords | 中間径フィラメント(1F)蛋白質 / リン酸化反応 / リン酸化ペプチド抗体 / Rho / Rhoキナーゼ / 細胞質分裂 |
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| Research Abstract |
我々は、細胞骨格中間径フィラメント(IF)の構築を制御するキナーゼについて、IF蛋白質の各部位のリン酸化状態を特異的に認識する抗体群を用いて検索してきたその結果、IF蛋白質は細胞分裂前期にCdc2キナーゼにより、また、細胞分裂後期には分裂溝で未知のキナーゼ(分裂溝領域で活性化をうけているので我々はcleavage furrow(CF)キナーゼと呼んできた。)により特異部位がリン酸化されることが明かとなった。最近、我々はこのCFキナーゼの分子同定に成功し、CFキナーゼはsmall GTP結合蛋白質Rhoの標的分子の1つであるRhoキナーゼであることを明らかにした。つまり(i)RhoキナーゼのGFAP/ビメンチンのin vitroリン酸化部位が細胞質分裂期の分裂溝近傍で生じるCFキナーゼによるGFAP/ビメンチンのリン酸化部位と完全に一致したこと、(ii)抗Rhoキナーゼ抗体を用いた解析によりRhoキナーゼが分裂溝領域に細胞質分裂期に特異的に集積することを示したのである。さらに、この分裂期に生じるIF蛋白質のリン酸化の意義を検討するため、各種キナーゼのリン酸化部位に変異を導入したIF蛋白質を作成し、細胞に発現させた。いくつかの変異IF蛋白質のうち、CFキナーゼ/Rhoキナーゼのリン酸化部泣に変異を導入した正蛋白質によって構築されフィラメントのみは、フィラメントの断裂・分配が生じないことが明がとなった。
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[Publications] H.Goto: "Phosphorylation of vimentin by Rho-associated Kinase at a uhigue amino-termnal site that is specifically phosphorylated during cytokinesis" J.Biol.Chem.273. 11728-11736 (1998)
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[Publications] Y.Kamei: "Visualization of mitotic radial lineage cells in the developing rat brain by cdc2 kinase-phosphorylated vimentin." GLIA. 23. 191-199 (1998)
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[Publications] M.Fujita: "Cell cycle-and chromatin binding state-dependent phosphorylation of human MCM heterohexameric complexesia Role for cdc2 Kinase" J.Biol.Chem. 273. 17095-17101 (1998)
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[Publications] H.Inada: "Rho-associated kinase phosphorylates desmin,the myogenic intermediate filament protein at unique amino terminal sites." Biochem.Biophys.Res.Commun. (in press).
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[Publications] Y.Yasui: "Roles of Rho-assaiated kinase in cytokinesis;Mutations in Rho-associated kinase phosphorylation sites pnpair cytokinetic segregation of glial filaments." J.Cell.Biol. 143. 1249-1258 (1998)
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[Publications] H.Kosako: "Specific Accumulation of Rho-associated kinase at the Cheavage Funow during cytokinesisi Cleauage furrow-spocific phesphory lation of intermediate filament." Oncogene. (in press).
