新しいウイルスベクター発現サイトカインを用いた動物の免疫誘導法の開発

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11556058
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 高橋 英司 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (50183439)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 中山 裕之 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 助教授 (40155891) ; 辻本 元 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (60163804) ; 甲斐 知恵子 東京大学, 医科学研究所, 教授 (10167330) ; 上田 進 日本生物科学研究所, 所長(研究職) (00072463) ; 加藤 篤 国立感染症研究所, ウイルス製剤部, 室長(研究職) (40152699)
• Keywords: サイトカイン / イヌ / センダイウイルス / GM-CSF / IL-6 / IL-8 / アジュバント

Research Abstract

本研究の目的は、組換えセンダイウイルス発現サイトカインを用いることにより、自然宿主でのサイトカインネットワークの基礎的研究を行い、その基盤の上に、蛋白あるいはウイルスベクターの投与による有効なサイトカインアジュバント免疫誘導法を開発・確立することである。
今年度は以下の成果を得た。
イヌIFNγのセンダイウイルスによる発現を検討した。すなわちConA刺激したイヌの脾細胞からRNAを抽出し、イヌIFNγのORFをRT-PCRでクローニングした。このクローンからイヌIFNγのORFをセンダイウイルスの転写開始シグナルを含むプライマーを用いたPCRで増殖し、センダイウイルスベクターに挿入した。このプラスミドとN,P,L各蛋白発現プラスミドであるpGEM-N、pGEM-、pGEM-LをあらかじめT7 RNA polymerase発現組換えワクチニアウイルスを感染させておいたLLCMK2細胞にco-transfectした。
co-transfectしたLLCMK2細胞からイヌIFNγ組換えセンダイウイルスが得られた。この組換えウイルスを発育鶏卵に接種し漿尿液を回収し、抗血清を用いてウエスターンブロッティングを行ったところ、おおよそヒトと同じ大きさのイヌIFNγ特異的なバンドが検出された。またこの組換えセンダイウイルス発現イヌIFNγのウイルス増殖抑制作用を調べたところ、その活性を有していることが確認された。

Research Products

• [Publications] Ohashi,K., et al.: "Properties of a new CDV isolate from a racoon dogs (Nyctereutes procyonoides viverrinus) in Japan."Veterinary Record. 148. 148-150 (2001)
• [Publications] Iwatsuki,K., et al.: "Antigenic differences in the H proteins of canine distemper viruses."Veterinary Microbiology. 71. 281-286 (2000)
• [Publications] Wakasa,C., et al.: "A sequence analysis of the genes encoding the phosphoprotein of recent isolates of canine distemper virus in Japan."Journal of Veterinary Medical Sciences. 62(1). 97-101 (2000)