2000 Fiscal Year Annual Research Report
有機溶媒可溶化と組み換えたいを用いた酵素による有機化合物合成
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11660097
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| Research Institution | Kogakuin University |
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Principal Investigator |
太田 隆久 工学院大学, 工学部, 教授 (30011844)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
坂口 政吉 工学院大学, 工学部, 助手 (80281351)
菅原 康里 工学院大学, 工学部, 講師 (20133324)
大勝 靖一 工学院大学, 工学部, 教授 (20011009)
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| Keywords | L-乳酸脱水素酵素 / 酵素による有機合成 / 活性部位 / 基質特異性 / バイオリアクター |
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| Research Abstract |
申請書に記載した12年度の計画のうち下記の成果が得られた
A.L-乳酸脱水素酵素(LDH)による2ケト酸の2ヒドロキシ酸への立体選択的還元
A-1.Bifidobacterium longumのLDHの基質認識部位周辺のアミノ酸残基を置換した変異体Gln102Ala、(2)Gln102Asn、(3)Gln102Ser、(4)Pro100Val、(5)Arg101Gly、(6)Ile240Gly、(7)Thr246Gly、(8)Arg101Gly/Gln102Asn、(9)Ile240Gly/Thr246Glyを作製し、各種2-ケト酸を基質としたときの活性を測定し、生理的基質であるピルビン酸のメチル基より長鎖の基質に対して活性のある変異酵素を得て、その特性を解析した
A-2.Thermus caldophilus,Thermus aquaticus LDHの基質特異性がB.longum LDHよりも広く、特にT.aquaticus LDHの基質特異性が広いことを確認した。
さらに、B.longumおよびのLDHのアロステリック性を軽減し、活性化物質フルクトース1,6-二リン酸無添加でも活性を示す変異酵素の取得に成功した。
B.LDHを利用したバイオリアクターの構築の基礎的検討
LDHを利用して連続的に2ケト酸から立体選択的に2ヒドロキシ酸を製造するバイオリアクターの構築へ向けての基礎的検討を試み、LDHをアミノセルロースに固定化した固定化酵素とアルコール脱水素酵素をアルデヒドセルロースに固定化した固定化酵素を用いて、補酵素を約400回転利用してピルビン酸を全てL-乳酸に還元する系の構築に成功した。
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