1999 Fiscal Year Annual Research Report
シェーグレン症候群と関連するTAP2遺伝子変異が及ぼすHLA結合抗原ペプチド変化
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11670446
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| Research Institution | Kobe University |
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Principal Investigator |
熊谷 俊一 神戸大学, 医学部, 教授 (00153346)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
森信 暁雄 神戸大学, 医学部, 助手 (10294216)
近藤 信一 神戸大学, 医学部・附属病院, 講師 (50153721)
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| Keywords | TAP2遺伝子 / 抗原ペプチド / シェーグレン症候群 / ペプチドトランスポーター |
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| Research Abstract |
(1)変異TAP2遺伝子の作製.
贈与されたTAP2^*BcDNAをpBluescriptベクターに挿入し、オリエンテーションを確認した。作成したプラスミドにShuldier.A.R.et al(Analyt.Biochem.194,9-15,1991)に従い突然変異を導入した。nucleotide number 1,729(A→Gの変異導入)と、nucleotide number 170との近傍で両方向に重なり合うプライマーを作成し、cDNAとベクターのPCR片を作成後、両者を混ぜてoverlap extensionを行った。このようにTAP2^*Bky2に特有の置換(エクソン9のコドン577がMet→Val)を入れた変異遺伝子を作製し、全核酸配列を確認した。
(2)TAP1,TAP2cDNAの作製.
pREP7のベクターにTAP1,pREP9のベクターにTAP2^*B,又はTAP2^*Bky2cDNAを挿入し、3種類のcDNAを作製した。selection markerとしてG418とhygromycinを選択し、薬剤濃度とエレクトロポレーション時の電圧などの条件の基礎的検討を行った。結果、電圧は220V、975μF、薬剤濃度はG418は1mg/mlでhygromycinは0.2mg/mlの濃度が至適であることを決定した。
(3)変異TAP2遺伝子導入細胞株の樹立
TAP遺伝子欠損細胞株T2に、エレクトロポレーション法により、TAP1遺伝子とともに、変異TAP2遺伝子あるいはwild type TAP2遺伝子を導入し、TAP2遺伝子のcodon577部分のみが異なる細胞株作製を行っている。現在までのところ、両者がうまく導入でき、長期間安定して生存するトランスフェクタントは得られていない。ベクターや条件も含め、再検討中である。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Akio Morinobu: "Association of glutathione S-transferase M1 homozygous null genotype with disease susceptibility to Sjogren's syndrome in Japanese"Arthritis Rheumat.. 42・12. 2612-2615 (1999)
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[Publications] Shinichi Kondo: "Factor XII Tenri,a novel cross-reacting material negative factor XII deficiency,occurs through a proteasome-mediated degradation"Blood.. 93・12. 4300-4305 (1999)
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[Publications] Akio Morinobu: "Bucillamine suppresses human Th1 cell development by a hydrogen peroxide-independent mechanism"J.Rheumatol.. In press.
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[Publications] Shunichi Kumagai: "Thioredoxin/ADF(adult T cell leukemia-derived factor)as an indicator of oxidative stress"Proceedings of the "Congress of Pathology and Laboratory Medicine-XX World IV Mercosul-XXXIII Brazilian". in press.
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[Publications] Katsuyasu Saigo: "Transfusion-related acute lung injury in an acute myelogeneous leukemia patient having anti-IgA2m(1) antibody"J Int Med Res. 27. 96-100 (1999)
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[Publications] Katsuyasu Saigo: "Successful treatment with all-trans retinoic acid combined with small doses of cytosine arabinoside for an aged patient with acute promyelocytic leukemia"Medical Postgraduates.. 37・5. 380-382 (1999)
