放射線治療抵抗性子宮頸癌におけるPTEN遺伝子変異の関与

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11670919
• Research Institution: Kansai Medical University
• Principal Investigator: 播磨 洋子 関西医科大学, 医学部, 講師 (80140276)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 今村 正浩 関西医科大学, 医学部, 助手 (40268339)
• Keywords: PTEN遺伝子 / 癌抑制遺伝子 / 染色体ヘテロ接合性消失 / 子宮頸癌 / 放射線治療 / 予後予測

Research Abstract

平成11年度の研究の評価
(1)研究計画の達成:放射線治療を目的に、当科を受診する子宮頸癌患者を対象とし、初診時にBiopsyを行い、検体を-80℃に速やかに保存した。ダイレクトシークエンス法によりPTEN遺伝子のexon1〜exon9の塩基配列の異常の有無を検討した。癌組織からTotal mRNAを抽出し、RNA PCR Kit (AMV)Ver.2.1(宝社製)を用いたRT-PCR(reverse transcriptase-polymerase chain reaction)にてPTENのコーディング領域を増幅した。そのPCR産物をスピンカラム(タネハシ機械社製)で精製後、dRhodamine Terminater Cycle Sequencing Kits,FS(ABI)でシークエンス反応を行った。反応物を再度スピンカラムで精製し、オートシークエンサー(ABI)で電気泳動を行った。現在、20例について解析を行ったが、2例にexon1の塩基配列の異常を検出した。60例の集積があるので、さらに検討を加える予定である。
(2)10q23.3LOHの検討:PTEN遺伝子が存在している10q23.3LOHについて、癌組織と新鮮な血液からDNAを抽出し、マイクロサテライトマーカーを用いてPCR (polymerase chain reaction)を行い、その産物の量を比較してLOHを解析した。-80℃に保存した癌組織と新鮮な血液からDNAを抽出した。各々の領域に存在するマイクロサテライトマーカーに設定した特異的な蛍光標識プライマー(ファルマシア社製)を用いて、ExpandTM High Fidelity PCR Kit(ベーリンガー社製)でDNAを増幅させた。10q23.3遺伝子に存在するマイクロサテライトマーカーの特異的なプライマーはD10S215,D10S541,D10S608,D10S610,D10S169を用いた。PCR産物を熱変性にて一本鎖にし、オートシークエンサー(ファルマシア社製)で電気泳動を行った。現在、10q23.3LOHの検討は3例に行い、今後、検討する予定である。

Research Products

• [Publications] Yoko Harima: "Bax and Bcl-2 expression predict response to radiotherapy in human cervical cancer"J Cancer Res Clin Oncol. 124. 503-510 (1998)
• [Publications] Yoko Harima: "Genetic alterations on chromosome 17p associated with response to radiotherapy in bulky cervical cancer"Br J Cancer. 81(1). 108-113 (1999)
• [Publications] Yoko Harima: "Bax and Bcl-2 protein expression following radiation therapy versus radiation plus thermoradiotherapy in Stage IIIb cervical carcinoma"Cancer. 88(1). 131-137 (2000)
• [Publications] Yoko Harima: "Loss of heterozygosity on chromosome 6p21.2 as a potential marker for recurrence after radiotherapy of human cervical cancer"Clin Cancer Res. (in press). (2000)
• [Publications] Atsutoshi Oka: "Determination of p53-mediated transactivational ability in radiation-treated cervical cancer"Cancer Detect Prev. (in press). (2000)
• [Publications] Imamura M: "Damage to DNA purified from the radioresitant prokaryote, Deinococcus radiodurans, by acid heating"Int J Mol Med. 3. 391-395 (1999)
• [Publications] 播磨洋子: "ハイパーサーミアの臨床 遺伝子異常とハイパーサーミアの効果"松田忠義、菅原 努、阿部光幸、田中敬正、編集 医療科学社. 445 (1999)
• [Publications] 播磨洋子: "癌の放射線治療 放射線感受性予測法"田中敬正、平岡眞寛、赤木清、笹井啓資 編集 金芳堂. 234 (1998)