破骨細胞形成におよぼすサイトカイン、接着分子の相互作用

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11671089
• Research Institution: Okayama University
• Principal Investigator: 井上 勝 岡山大学, 医学部・附属病院, 講師 (20253023)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 守分 正 岡山大学, 医学部・附属病院, 講師 (40243505) ; 田中 弘之 岡山大学, 医学部・附属病院, 講師 (80231413) ; 清野 佳紀 岡山大学, 医学部, 教授 (80028620)
• Keywords: 破骨細胞 / シグナル伝達 / リン酸化チロシン / マクロファージコロニー刺激因子 / 細胞外マトリックス / 細胞接着因子

Research Abstract

細胞が細胞外マトリックスと接触することは、多くの細胞にとって、必須である。これらの作用は、主にインテグリンの介在の上になり立つが、細胞接着因子を介したシグナル伝達系と、増殖因子からのシグナル伝達系には重複するところが多い。2つのシグナル伝達系の関与を破骨細胞前駆細胞において検討した。
6週齢のC3Hマウスの大腿骨、脛骨より骨髄細胞を分離、24時間後に非接着分画よりFicoll-hypaque遠心法にて、マクロファージ分画を回収したのち、100mmプラスチックデッシュ上で3日培養した。培養はマクロファージコロニー刺激因子(M-CSF)の存在下で10%FBS添加αMEMで行った。この方法により、M-CSF依存性の破骨細胞前駆細胞を得た。細胞をPBSにて2回洗浄、0.1%BSA添加αMEMに変更したのみの対照群と、細胞を剥離、回収した実験群を作成した。実験群はPFAデッシュで非接着状態で40分培養後、プラスチックデッシュ(A群)、PFAデッシュ(NA群)上でさらに15分培養後、全細胞を回収した2群を作成した。対照群、実験群ともに1%NP-40を含むCell lysis bufferにて細胞を溶解した。SDS-PAGEにてCell lysateを分画した後、Western blotをおこないリン酸化チロシンにたいする抗体を使いECL法にて検討した。
対照群に比較してA群、NA群ともにリン酸化チロシンの発現は減少していた。そのなかでも50kDaに相当するバンドはNA群では消失していたが、A群では対照群の60%程度に回復していた。
50kDaの蛋白は、細胞の接着により明らかにリン酸化が制御されていることから細胞骨格の構成因子もしくはそれに関連した信号伝達物質である可能性がある。