2001 Fiscal Year Annual Research Report
卵巣組織の凍結保存法および解凍後の器官培養での卵胞刺激法に関する研究
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11671640
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| Research Institution | Yokohama City University |
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Principal Investigator |
池田 万里郎 横浜市立大学, 医学部・附属病院, 講師 (50254173)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
高橋 恒男 横浜市立大学, 医学部・附属病院, 助教授 (60179497)
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| Keywords | 卵巣組織 / 凍結保存 / ガラス化法 / vitrification |
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| Research Abstract |
前年度までにethylene glycolを用いたVitrification法によりマウス卵巣組織片の凍結保存を行い、融解後の卵胞卵子(GV期卵)が体外培養することによりMII期へ成熟することを示した。今年度はそのようにして得られたMII期卵を用いて体外受精を試みた。凍結融解後のマウス卵巣組織より回収したGV期卵の成熟率は73.6%で、新鮮GV期卵を用いた場合の92.7%と比較して低率であった。同様に凍結融解後のマウス卵巣組織より回収したGV期卵の受精率は56.1%であり、新鮮GV期卵を用いた場合の84.3%と比較して低率であった。そこで凍結融解法の再検討を行い、更なる検討を加えてみた。
6週令のB6D2F1雌マウスにPMSG5IUを投与し、48時間後摘出した卵巣を2分割にして実験に用いた。耐凍剤処理は、(1)EFS10/15分(25℃)、EFS20/15分(4℃)、EFS40/5分(4℃)(2)EFS10、EFS20の処理時間を10分に改変した2法で行い、液体窒素中に保存した。融解は、凍結チューブを室温(25℃)にて30秒間保持した後、(A)EFS20/10分(4℃)、EFS10/10分(25℃)、0.5M Sucrose/10分(25℃)(B)EFS10/10分(4℃)、0.5M Sucrose/10分(25℃)の2法で行った。融解した卵巣組織中よりGV期卵を採取し、Waymouth MB752/1中で培養を行った。
解凍後の卵巣組織中より採取したGV期卵の生存率は(1)-(A)、(1)-(B)、(2)-(A)、(2)-(B)で、それぞれ55.4%、80.5%、48.1%、13.6%だった。また、培養を行った結果、MII期への成熟率は、61.1%、72.7%、37.3%、5.9%だった。これらのことから卵巣組織片の凍結融解法として、(1)-(B)の方法が有効であることが確認された。
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