3次元人工腹膜の機能化と腹膜繊維化機構の解明に関する研究

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11694181
• Research Institution: University of East Asia
• Principal Investigator: 堀内 孝 東亜大学, 工学部, 教授 (10201758)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 太田 裕治 東洋大学, 工学部, 助教授 (50203807) ; 長澤 幸一 東亜大学, 工学部, 講師 (90289299)
• Keywords: 腹膜透析 / 三次元培養 / 腹膜硬化症 / 腹膜修復 / 画像解析 / 細胞遊走 / 細胞増殖

Research Abstract

ラット尾より抽出した酸可溶性コラーゲンを4mg/mlの濃度にてトランスウェルに100μl入れゲル化した後、ラット腹膜繊維芽細胞を1×10^4、2×10^4、1×10^5/mlの細胞密度で懸濁した間質モデルを各々100μl積層した。F12培地で2日間培養後、トランスウェル底部の膜の外側に腹膜中皮細胞を1×10^5/ml播種し、細胞接着が十分であると判断できるまで培養した。積層化した腹膜モデルはM199培地で3週間培養し、その形態的変化を観察している。コラーゲンに包埋された繊維芽細胞は2×10^4/mlの細胞密度以上ではFCS未添加においても細胞の伸展がみられたが、それ以下では形態の変化は僅かであった。トランスウェル上において、本条件下ではコラーゲンの収縮は観察されなかった。間質モデルに隣接する膜上の腹膜中皮細胞は播種後3週間以内では玉石状の形状を保つことができるようになった。現在、滲出性のマクロファージを用いて経マトリックスの遊走実験を行っている。
試作した3次元積層培養モデルを用い、腹膜中皮細胞傷害や腹膜線維芽細胞傷害時の修復過程をIn vitro系で再現することを目的に、中皮細胞層の剥離モデル(平成11年度成果)を連続的な顕微鏡下ビデオ撮影を行うとともに、A/D変換、画像情報保存、編集を施行する技術を確立している。傷害モデルは1N水酸化ナトリウムの滴下によるdenudationであるが、最も著明であった修復経路は残存部位からの遊走であり、増殖は遊走にて中皮細胞が移動した間隙を中心に、denudationがほぼ完了した時期より活発化するようである。現在、画像解析と免疫染色により定量・定性両面から研究を進めており来年度の重点課題である。

Research Products

• [Publications] Takashi HORIUCHI, et al: "Expression of transforming growth factor (TGF-β1)mRNA and contractility of extra cellular..."Clin Exp Nephrol. 4. 105-113 (2000)
• [Publications] 大畑淳,堀内孝: "培養腹膜線維芽細胞を用いた急性傷害モデルにおけるTGF-β1とVEGF産生遺伝子の発現"人工臓器. 29(3). S61 (2000)
• [Publications] Takashi HORIUCHI, et al: "Effect of glucose degradation products (GDP) and pH in peritoneal dialysate on proliferation."J Am Soc Nephrol. 11. 209A (2000)