宿主因子によるパラミクソウイルスの遺伝子発現と病原性の制御に関する研究

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12470071
• Research Institution: Hiroshima University
• Principal Investigator: 吉田 哲也 広島大学, 医学部, 教授 (00022905)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 清谷 克寛 広島大学, 医学部, 講師 (00106824) ; 坂口 剛正 広島大学, 医学部, 助教授 (70196070)
• Keywords: センダイウイルス / 浜松株 / 弱毒化 / リーダー変異 / ウイルス回収系 / V蛋白 / innate immunity

Research Abstract

マイナス鎖RNAセンダイウイルス(SeV)は、マウスの肺炎ウイルスである。本研究は宿主因子とSeVの病原性発現及び遺伝子発現との関わりを明らかにすること、特に、(1)SeV強毒野外株(浜松株)のニワトリ受精卵継代による弱毒化における宿主因子との相互作用、及び(2)免疫制御蛋白と予想されているSeVV蛋白とマウス宿主因子との相互作用の実体を解明することを目的としている。
(1)12年度の研究により、強毒野外株SeV(浜松株)の卵継代による弱毒化は宿主依存性のウイルスゲノム複製不全により起こること、弱毒化と関連すると推定されるゲノムの変異はプロモーターの存在するリーダー部位とRNA合成酵素L遺伝子に存在することを明らかにした。13年度は、これらの変異のうちリーダー変異の弱毒化における意義の検討を行った。(1)まず浜松株全長cDNAを作製してcDNAからの浜松株回収系を確立した。(2)浜松株cDNAにリーダー変異を導入した変異ウイルスを作製した。(3)作製した変異ウイルスの病原性をマウス感染実験系で検討した結果A20U, A24U両リーダー変異を導入したウイルスの病原性が著しく低下したので、これらは弱毒化変異であることが明らかとなった。今後、マウス肺、ニワトリ胎児初代培養細胞において、ウイルスの増殖能及びゲノムの転写・複製を検討する。
(2)12年度の研究により、V蛋白C端側特異部分が実際にZn結合能を持つこと、このZn結合能はウイル、ス病原性発現に関与していることを明らかにした。13年度は、V蛋白の作用標的を明らかにすることを目的とした。V蛋白の標的はinnate immunityと予想されるので、SeV回収系で作製したV欠損SeVの増殖を、ヌードマウス、IFNRα/β及びIFNγノックアウトマウス、NK欠損マウスなどで比較検討したが、いずれのマウスにおいても正常マウスと同様の増殖態度を示し、V蛋白の標的を特定することはできなかった。

Research Products

• [Publications] Cheng Huang: "Involvement of the zinc-binding capacity of Sendai virus V protein in viral pathogenesis"Journal of Virology. 74(17). 7834-7841 (2000)
• [Publications] Yutaka Fujii: "Conseved and non-conserved regions in the Sendai virus genome : evolution of a gene possessing overlapping reading frames"Virus Genes. 22(1). 47-52 (2001)
• [Publications] Katsuhiro Kiyotani: "Attenuation of a field Sendai virus isolate through egg-passages is associated with the impediment of viral genome replication in mouse respiratory cells"Archieves of Virology. 146. 893-908 (2001)
• [Publications] 福原徳子: "センダイウイルスV蛋白に高度に保存されたアミノ酸のウイルス病原性とRNA editingにおける重要性"広島大学医学雑誌. 50(1). 1-12 (2002)