2000 Fiscal Year Annual Research Report
β切断へのシフトとアミロイドβ蛋白産生機構に関する生化学的分子生物学的研究
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12470197
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| Research Institution | Saitama Medical University |
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Principal Investigator |
深津 亮 埼玉医科大学, 医学部, 教授 (10113614)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
木村 浩一 北海道工業大学, 工学部, 助教授 (90177915)
続 佳代 札幌医科大学, 医学部, 助手 (60207420)
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| Keywords | アルツハイマー病 / APP / Aβ / Aβブレイカー蛋白 / Aβブレイカー蛋白遺伝子 / 遺伝子導入 / マウス腹腔マクロファージ |
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| Research Abstract |
アルツハイマー病(AD)脳には、アミロイド前駆体蛋白(APP)から分解処理を受けてアミロイドβ蛋白(Aβ)が産生され、凝集・沈着する過程が最も重要である。Aβ産生には、α切断からβ切断へのシフトが生じているが、ごく最近になってβ切断酵素が同定されたことから本研究では、以下の検討を行った。
1.β切断酵素に関する研究:
1)β切断酵素に対する抗体の確立:β切断酵素のクローニングが成功して、予想されるアミノ酸配列(502aa)が明らかになった。そのアミノ酸配列からN末端、中間部分、C末端部分の合成ペプチドを作成して、ウサギに免疫して特異抗体を確立した。この抗体はウエスタンブロットでは50kDa前後のバンドを認識することを確認した。
2)β切断酵素のmRNAの測定の試み:β切断酵素遺伝子の塩基配列(2526bp)から、primerを合成してRT-PCRを行いmRNAの測定を試みている。これまで試行錯誤を繰り返して、ようやく定量できるようになった。
2.家族性ADの原因遺伝子である変異型APP遺伝子(Sweden型、British型)を培養細胞に導入:
強制発現させた場合、ならびに散発性ADのモデルとなりうる新しいin vitroの実験系での、β切断へのシフトが引き起こされる機構について、免疫病理学的、生化学的、分子生物学的検討を加えて検討中である。
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[Publications] Tsuzuki K,Fukatsu R, et al.: "Transthyretin binds amyloid β peptides, Aβ1-42 and Aβ1-40 to form complex in the autopsied human kidney -possible role of transthyretin for Aβ sequestration-"Neuosience Letters. 281. 171-174 (2000)
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[Publications] 深津亮,続佳代 他: "Nasu-Hakola病に認められるアルツハイマー病変に関する検討-アミロイド変化の生化学的、免疫病理学的検討-"Neuropathology. 20. 154 (2000)
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[Publications] Tsuzuki K,Fukatsu R, et al.: "Prion protein is colocalized in amyloid β protein aggregates in the rimmed vacuoles of chloroquine myopathy in rat"Neuroscience Letters. (in press). (2001)
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[Publications] Fukatsu R,Tsuzuki K, et al.: "Alzheimer's senile pathology observed in Membranous Lipodystrophy (Nasu-Hakola disease)"Brain Pathology. 10・4. 516 (2000)
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[Publications] Fukatsu R,Tsuzuki K, et al.: "Cultured myocyte systems under chloroquine as an experimental model to study APP, PS-1 processing for Aβ production"Brain Research. (in press). (2001)
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[Publications] Nakano N,Hatakeyama Y, et al: "Eye-Head Coordination Abnormalities and Regional Cerebral Blood Flow in Alzheimer's Disease"Prob Neuro-Psychopharmacol & Biol Psychiat. 23. 1053-1062 (1999)
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[Publications] 深津亮,続佳代: "IV 病因・病態「臨床精神医学講座」special issue 第9巻 アルツハイマー病"松下正明 総集編 三好好峰,小坂憲司 責任編集 中山書店 東京. 12 (2000)
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[Publications] 藤井充,村上新治,深津亮: "IV 病因・病態「臨床精神医学講座」special issue 第9巻 アルツハイマー病"松下正明 総集編 三好好峰,小坂憲司 責任編集 中山書店 東京. 23 (2000)
