2000 Fiscal Year Annual Research Report
テロメラーゼ発現制御機構解明とそのプロモータを利用した癌遺伝子治療の実験的研究
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12470330
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
並木 幹夫 金沢大学, 医学部, 教授 (70155985)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
京 哲 金沢大学, 医学部, 講師 (50272969)
高 栄哲 金沢大学, 医学部・附属病院, 助手 (90283134)
越田 潔 金沢大学, 医学部・附属病院, 講師 (70186667)
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| Keywords | テロメラーゼ / プロモーター / 遺伝子治療 / アンドログン / 前立腺癌 / 細胞周期 |
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| Research Abstract |
(1)hTERT promoter deletion mutantを用いたコアプロモーター領域の同定
アンドロゲン非依存性ヒト前立腺癌細胞株TSUPr-1を用い,hTERT promoter plasmidをリポフェクチン法で細胞に導入し、種々の濃度の薬剤投与時のプロモーター活性の変化をDual luciferase assay法で検討し、プロモーター活性領域についてmappingを行なった。
(2)hTERTプロモーターを活性化および抑制する因子の同定
cytosine analogである5-azacytidineを作用させることにより、p16などの癌抑制遺伝子やE-cadherinなどの癌転移・浸潤関連遺伝子の発現が増加すると同時にhTERTプロモーター活性が低下することが証明された。また、この現象が脱メチル化によるかどうか確認するために、PCR-based methylation assay法にて検証した。
(3)テロメラーゼ活性の変化と細胞周期調節の関係の検討
種々の細胞周期調節因子を作用させた際のhTERT発現を検討したところ、細胞周期とテロメラーゼ活性は変化は相関することが明らかになった。
(4)hTERTプロモーターに対するantisense ODNの細胞増殖抑制の検討
hTERTコアプロモーターに対するantisense ODNを作製し、FuGENE6を用いて前立腺癌細胞PC3内に導入すると、細胞増殖は有意に抑制された。
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