集合系マシーナリーのモデル細胞としての高度好熱菌T.thermophilus

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13033025
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 倉光 成紀 大阪大学, 大学院・理学研究科, 教授 (60153368)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 増井 良治 大阪大学, 大学院・理学研究科, 講師 (40252580)
• Keywords: UvrA / UvrB / UvrC / UvrD / MutS / MutL / Nudix / house-keeping enzyme

Research Abstract

高度好熱菌Thermus thermophilus HB8のDNA修復に関与する酵素は少なくとも50種類存在することが明らかにされているが、その中で、UvrA, UvrB, UvrC, UvrDなどが関与するヌクレオチド除去修復機構は、様々な種類の障害を認識、修復する系として重要である。高度好熱菌のこれら蛋白質を大量発現・精製し、また蛍光色素を傷害として含む基質DNAを用いてUvrABCの傷害ヌクレオチド除去活性の測定した。一方、ミスマッチ修復系にはMutSやMutLが関与するが、MutSと約30%アミノ酸配列が相同なMutS2と呼ばれる機能未知の遺伝子が存在する事が明らかになった。このMutS2を大量発現・精製し、種々の活性を測定したところ、ミスマッチ修復過程において2本鎖・DNAに非特異的に結合することが明らかになり、MutS2がミスマッチ認識以外の機能を持つことが示唆された。また、Nudixタンパク質は、細胞にとって有害な物質や過剰に増加した代謝産物を分解するhydrolaseの総称で、高度好熱菌には計8種類存在するが、これらNudixタンパク質の量産化・精製を行い、構造・機能解析を行った。その他の集合系マシーナリーとして,組換え修復系酵素群,アミノ酸代謝系などの立体構造解析および分子機能解析も行った。

Research Products

• [Publications] Tadashi Nakai: "Coexpression, purification, crystallization and preliminary X-ray characterrzation of glycine decarboxylase(P-protein) of the glycine-cleavage system from Thermus thermophilus HB8"Acta Cryst. D59. 554-557 (2003)
• [Publications] S.Kuramitsu: "STRUCTURES AND FUNCTIONS OF HYPOTHETICAL PROTEINS FROM THERMUS THERMOPHILUS HB8"Acta Cryst.. A58. C195 (2002)
• [Publications] N.Nakagawa: "STRUCTURAL AND FUNCTIONAL ANALYSES OF β-DOMEINS OF Uvr B AND TRCF"Acta Cryst.. A58. C293 (2002)
• [Publications] T.Wada: "STRUCTURE DETERMINA OF NOVEL PROTEIN OF UNKNOWN FUNCTION SYNTHESIZED USNG A CELL-FREE SYSTEM"Acta Cryst.. A58. C302 (2002)
• [Publications] 倉光成紀: "構造プロテオミクスは何をめざすのか?"蛋白質 核酸 酵素. 47・8. 865-881 (2002)
• [Publications] 倉光成紀: "バクテリア蛋白質の網羅的発現"蛋白質 核酸 酵素. 47・8. 1009-1013 (2002)