2001 Fiscal Year Annual Research Report
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13670031
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| Research Institution | Kansai Medical University |
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Principal Investigator |
渡辺 淳 関西医科大学, 医学部, 助教授 (40148557)
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| Keywords | arylhydrocarbon receptor / HSP90 / 転写調節 / 細胞内輸送 / メチルコランスレン / CYP1A1 / ラット / 肝 |
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| Research Abstract |
1.ダイオキシン感受性の肝細胞由来株化培養細胞(H-4-II-E cell)の培養液にDMSOに溶解したメチルコランスレン(MC)を加えて経時的に採材し、Cy2標識抗ダイオキシン受容体(arylhydrocarbon receptor : AhR)抗体及びCy5標識し抗HSP90抗体を用いて2重染色の後に共焦点レーザー走査顕微鏡で観察した。MC刺激前、AhRとHSP90は細胞質に相互に近接して散在していた。MC刺激後10-20分でHSP90とAhRは離れてAhRは核に移行した。HSPが核に移行得るかどうかについては、現在、ECL試薬を用いた高感度化学発光反応(3を参照)に検出系を変えて検討中であるが、AHRが少なくともHSP90とヘテロマーを形成したまま移行してはいない可能性が示された。
2.ラット肝細胞cDNAライブラリよりAhRのcDNAを得てPCRで増幅し、E.ColiにトランスフェクトしてインタクトなAhRおよび核移行シグナル領域を欠いたAhrを得た。核移行シグナルを欠いたAhRは核に移行しなかったが、その後の解析で、AhRの細胞内輸送がAhRのシグナルだけを認識しているのではなく、核への輸送タンパクを介している可能性が示された。現在、この機構の詳細について調査中である。
3.高感度化学発光反応を用いた組織/細胞レベルにおける機能性タンパクおよび核酸(現段階ではm-RNAのみ)の光子計測による計測法をほぼ確立した(投稿準備中)。本方法を用いて、今回研究対象としたAhRを介するMC誘導型タンパクの転写産物であるCYP1A1およびその類縁の分子種CYP2B2について、ラット肝細胞におけるこれらのタンパク(酵素)およびそのmRNAの高感度定量解析をおこなった(論文作成中)。
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