萎縮性側索硬化症の神経病理学的研究-運動ニューロンの細胞病理像を中心として-

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13670663
• Research Institution: Jichi Medical University
• Principal Investigator: 中野 今治 自治医科大学, 医学部, 教授 (40092423)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 加藤 信介 鳥取大学, 医学部, 助教授 (60194817)
• Keywords: ALS / 運動ニューロン / apotosis / カスパーゼカスケード / Caspase-3

Research Abstract

ALSにおける運動ニューロン死の仮説の1つとしてapoptosisが注目されているが、この仮説の根拠になったデータの多くは、培養された運動ニューロンや変異SOD1遺伝子を導入したモデルマウスでの所見に基づくものであり、実際のALS患者でapoptosisが生じるか否かを示す所見は乏しい.apoptosisシグナルの古典的伝達経路のうち,カスパーゼカスケードの上流ではapoptosis刺激の種類によりその伝達経路が異なっている.Fasを介するapoptosisでは,リガンドであるFasLが対応する受容体に結合する.一方増殖因子の枯渇や放射線等の刺激により誘発されるapoptosisは,ミトコンドリアを経由してカスパーゼカスケードの活性化を引き起こす.Caspase-3(CPP32)は、apoptosisカスケードの最終実行蛋白である.ALSの運動ニューロン死がapoptosisであるなら、この蛋白の発現が増強していることが予想されるが、その発現をALSにおいて免疫組織化学的に検討した報告は未だ見当たらない.そこで、本年度はAL3剖検例脊髄運動ニューロンにおけるCPP32の発現を免疫組織化学的に検討した.症例は、ALS3例,対照3例(OPLL,心筋梗塞,副腎癌)である.剖検後脊髄を速やかに取り出し,-80℃で凍結保存した後,頚髄(C8)および腰髄(L5)より10μm厚の凍結切片を作成した.一次抗体にはrabbit polyclonalclonal抗CPR32抗体(理研高橋良輔博士御供与)およびmouse monoclonal抗Caspase-3抗体(SantaCruzBiotechnology : sc-7272)を用い,HISTOSTAIN SP-KIT(ZYMED社)によりCaspase-3の発現を検討した.Rabbit polyclonalclonal抗CPP32抗体、mouse monoclonal抗Caspase-3抗体のいずれを用いた検討に於いても頚髄・腰髄ともにALSと対照間でCPP32の明らかな発現は認められず、対照とALSの染色性にも明瞭な差はみられなかった.ALSにおける神経細胞死にapoptosisの実行が関与している可能性を考慮し実験を進めたが,2種類の抗Caspase-3抗体を用いた免疫組織化学的検討でALSの脊髄では対照と比べ明らかな差異はみられなかった.今回の結果からは、ALSの運動ニューロン死が古典的apoptosis伝達経路を介している可能性は否定的であった.

Research Products

• [Publications] Muramatsu S, et al.: "Behavioral recovery in a primate model of Parkinson's disease by triple transduction of striatal cells with adeno-associated viral vectors expressingdopamine-synthesizing enzymes"Hum Gene Ther. 13. 345-354 (2002)
• [Publications] Wang L-J, et al.: "Delayed delivery of AAV-GDNF prevents nigral neurodegeneration and promotes functional recovery in a rat model of Parkinson's disease"Gene Ther. 9. 381-389 (2002)
• [Publications] Wang L-J, et al.: "Neuroprotictive effects of glial cell line-derived neurotrophic factor mediated by an adenoassociated virus vector in a transgenic animal model of amyotrophic lateral sclerosis"The Journal of Neurosciene. 22. 6920-6928 (2002)
• [Publications] Okada T, et al.: "Adeno-associated virus vectors for gene taransfer to the brain"METHODES. 28. 237-247 (2002)
• [Publications] Ishihara K, et al.: "Lewy body-free nigral degeneration-a case report"J Neurol Sci. 198. 97-100 (2002)
• [Publications] Tsuchiya K, et al.: "Constant involvement of the Betz cells and pyramidal tract in amyotrophic lateral sclerosis with dementia : a clinicopathological study of eight autopsy cases"Acta Neuropathol. 104. 249-259 (2002)
• [Publications] Tsuchiya K, et al.: "Sporadic amyotrophic lateral sclerosis with circumscribed temporal atrophy : a report of an autopsy case without dementia and with ubiquitinated intraneuronal inclusions"Neuropathology. 22. 308-316 (2002)
• [Publications] Ozawa K, et al.: "Gene therapy for Parkinson's disease using AAV vectors. Mapping the Progress of Alzheimer's and Parkinson's disease"Kluwer Academic/Plenum publishers. 4 (2002)
• [Publications] 中野 今治: "今日の診断指針、第5班"医学書院、東京、. 2092 (2002)