膵癌治療遺伝子ライブラリーの構築とそれに基づく特異的治療ベクターの開発

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14370345
• Research Institution: Hokkaido University
• Principal Investigator: 加藤 紘之 北海道大学, 大学院・医学研究科, 教授 (80002369)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 宮本 正樹 北海道大学, 医学部附属病院, 助手 (40333611) ; 奥芝 俊一 北海道大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (70185536) ; 近藤 哲 北海道大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (30215454) ; 多田 光宏 北海道大学, 遺伝子病制御研究所, 助教授 (10241316)
• Keywords: 膵癌 / 遺伝子治療 / 遺伝子ライブラリー / アデノウイルスベクター / RCAS1 / Caveolin-1

Research Abstract

膵癌で高発現する癌抗原のスクリーニングを行った.その結果,膜蛋白である癌抗原RCAS1のmRNAが膵癌細胞株9株中8株で発現していることがRT-PCR法で確認され、切除された膵癌組織においては約90%の頻度でRCAS1が強発現していることが確認された.さらに,RCAS1の強発現が膵癌患者の予後と強く相関することが明らかになった。この結果とRCAS1遺伝子のプロモーター領域の塩基配列が解読されたことから、RCAS1プロモーターをヒト胎児腎細胞株である293細胞よりクローニングした.RCAS1プロモーターをルシフェラーゼ発現ベクターであるpGL3に導入し,膵癌細胞株にてルシフェラーゼアッセイを施行した結果、高いプロモーター活性を認めた.同様の方法でCaveolin-1遺伝子の過剰発現が膵癌患者の予後と強く相関することが明らかになった。一方、治療遺伝子としてBax、HK1をクローニングしたほか、KLAKの繰り返し配列を有するDNAを合成し、これらが発現したときの細胞毒性を評価した。次にアデノウイルスベクターにこれら遺伝子群を自由に入れ替えて導入するためのシャトルベクターを構築し、各プロモーター遺伝子と各治療遺伝子の全ての組み合わせたアデノウイルスが容易に作成できるシステムを構築した。広範な遺伝子発現解析を実現することを目的として、関連施設との共同作業により、十分なインフォームドコンセントのもとで、膵癌切除組織ライブラリーを構築した。これらを材料としてDNAマイクロアレイ法を用いた遺伝子発現解析を開始した。

Research Products

• [Publications] Hiraoka K: "High expression of tumor-associated antigen RCAS1 in pancreatic ductal adenocarcinoma is an unfavorable prognostic marker"Int J Cancer. 99. 418-423 (2002)
• [Publications] Suzuoki M: "Impact of caveolin-1 expression on prognosis of pancreatic ductal adenocarcinoma"Br J Cancer. 87. 1140-1144 (2002)