DNA修復遺伝子抑制によるヒト肺癌細胞の放射線、薬剤耐性の克服と遺伝子治療

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14570540
• Research Institution: Chiba University
• Principal Investigator: 瀧口 裕一 千葉大学, 医学部附属病院, 講師 (30272321)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 黒須 克志 千葉大学, 大学院・医学研究院, 助手 (20291106) ; 巽 浩一郎 千葉大学, 大学院・医学研究院, 助教授 (10207061) ; 栗山 喬之 千葉大学, 大学院・医学研究院, 教授 (20009723)
• Keywords: DNA修復遺伝子 / Ku70 / アンチセンス / 放射線感受性 / 抗癌剤感受性 / 遺伝子治療 / 肺癌

Research Abstract

1)細胞株におけるアンチセンスDNAおよび野生型Ku70遺伝子の発現
遺伝子導入された細胞よりRNA、タンパク質を抽出し、それぞれNorthern blotting、Western blottingによりKu70遺伝子の発現の抑制パターンを検討した。Northern blottingではアンチセンスDNAの発現を確認したが、それによる野生型Ku70 mRNAの発現に有意な差は認められなかった。しかし、Western blottingでは、Ku70蛋白の明らかな発現低下を認めた。しかし、Ku80、DNA-PKcsの蛋白発現に明らかな差を認めなかった。Electromobility shift assayではアンチセンスDNA導入細胞における、DNA end-binding活性の低下を認めた。
2)In vitro放射線感受性試験
次にin vitro.において0〜12Gyの照射を行い、colonogenic assayによる放射線感受性を検討し、親株、センスDNAを導入した細胞を陰性対照として比較した。その結果、アンチセンスDNAを導入した細胞株では、放射線感受性が亢進しており、これは主にlinear-quadratic modelにおける、α値およびα/β値が親株に比べて約2倍になっていることによることが分かった。
3)In vitro抗癌剤感受性テスト
抗癌剤感受性についても、Ku70遺伝子の発現抑制による効果を検討した。DNA二本鎖切断を生じることが明かなブレオマイシン、methyl methanesulfonateに対しては、アンチセンスDNAを導入した細胞株の薬剤感受性が著しく亢進したが、DNA二本鎖切断を生じないことが明かなパクリタキセルでは変化は認められなかった。DNA二本鎖切断を生じるかどうか議論の余地のある、シスプラチン、マイトマイシンCに対しては本実験系では明らかな変化は認められなかった。

Research Products

• [Publications] Omori S., Takiguchi Y.et al.: "Suppression of a DNA double-strand break repair gene, Ku70, increases radio-and chemosensitivity in a human lung carcinoma cell line"DNA Repair. 1. 299-310 (2002)
• [Publications] Suda A., Takiguchi Y.et al.: "Gene delivery to the lung by means of syngeneic fibroblasts : an experimental model."Experimental Lung Research. 29・4. 227-241 (2003)
• [Publications] Shingyoji M., Takiguchi Y.et al.: "Detection of tumor specific gene expression in bone marrow and peripheral blood from patients with small cell lung carcinoma."Cancer. 97・4. 1057-1062 (2003)
• [Publications] Watanabe R., Takiguchi Y.et al.: "Feasibility of combination chemotherapy with cisplatin and etoposide for haemodialysis patients with lung cancer."British Journal of Cancer. 88・1. 25-30 (2003)
• [Publications] Tada Y., J O.Wang, Wada A., Takiguchi Y.et al.: "Fas ligand-expressing tumors induce tumor-specific protective immunity in the inoculated hosts but vaccination with the apoptotic tumors suppresses antitumor immunity."Cancer Gene Therapy. 10・2. 134-140 (2003)
• [Publications] Takiguchi Y.: "Hiccups as an adverse reaction to cancer chemotherapy."Journal of the National Cancer Institute. 94・10. 772-772 (2002)