2015 Fiscal Year Annual Research Report
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15H02349
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
影山 龍一郎 京都大学, ウイルス研究所, 教授 (80224369)
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2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 成体脳神経幹細胞 / 胎児神経幹細胞 / 発現動態 / Mash1/Ascl1 / Hes1 / 発現振動 / 静止状態 / 次世代シーケンサー |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Hes1タンパク質の発現量を正確に反映する発光レポーターマウスLuc2-Hes1 BAC Tgと蛍光レポーター・ノックインマウスVenus-Hes1 KI Tg、およびMash1/Ascl1タンパク質の発現量を正確に反映する発光レポーターマウスLuc2-Ascl1 BAC Tgと蛍光レポーターマウスVenus-Ascl1 BAC Tgを用いて成体脳の海馬歯状回および側脳室上衣下帯領域のスライス培養を行い、発光および蛍光量を測定した。その結果、活性型神経幹細胞ではMash1/Ascl1タンパク質の発現量がダイナミックに変化すること、一方、静止状態の神経幹細胞ではHes1の発現が持続することが分かった。今後、より多くの細胞について発現動態を確認する必要がある。
一方、Nestinプロモーター下に細胞周期レポーターであるFucciをつないだNestin-Fucciマウスを使ってG1期の胎児神経幹細胞を集めた。また、静止状態の成体脳神経幹細胞も回収し、次世代シーケンサーによる網羅的な遺伝子発現解析を行った。その結果、G1期の胎児神経幹細胞および静止状態の成体脳神経幹細胞において発現量の異なる遺伝子群の同定に成功した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
成体脳神経幹細胞と胎児脳神経幹細胞との発現動態の差を明らかにしていくための技術基盤が確立した。その結果、成体脳スライス培養においてMash1/AsclおよびHes1の発現動態のリアルタイム観察に成功し、胎児脳との違いが明らかになりつつある。また、G1期の胎児神経幹細胞および静止状態の成体脳神経幹細胞において発現量の異なる遺伝子群の同定に成功したので、Mash1/AsclやHes1と協調して活性化に関わる候補因子を同定するための情報が得られた。
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| Strategy for Future Research Activity |
成体脳神経幹細胞と胎児脳神経幹細胞との間でMash1/AsclやHes1の発現動態が異なることが明らかになりつつある。光遺伝学的手法を用いて、成体脳神経幹細胞においてこれらの因子の発現動態を胎児期と同じようなものに変える。現在の光照射条件では、成体脳神経幹細胞における光誘導効率があまり良くない。今後、光誘導の効率を上げるために、光強度や照射時間を変えて照射条件を強める。
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[Journal Article] Oscillatory control of Delta-like1 in cell interactions regulates dynamic gene expression and tissue morphogenesis2016
Author(s)
Shimojo, H., Isomura, A., Ohtsuka, T., Kori, H., Miyachi, H., and Kageyama, R.
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Journal Title
Genes & Development
Volume: 30
Pages: 102-116
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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