2016 Fiscal Year Annual Research Report
Sterylglucoside metabolism of eucaryotic microbes
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15H04488
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
伊東 信 九州大学, 農学研究院, 教授 (40253512)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
角田 佳充 九州大学, 農学研究院, 教授 (00314360)
谷 元洋 九州大学, 理学研究院, 准教授 (20452740)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | エルゴステリルグルコシド / 糖脂質 / 出芽酵母 / ABCトランスポーター |
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| Outline of Annual Research Achievements |
エルゴステリルグルコシド分解酵素EGCrP2を欠損したC. neoformansはEGが液胞に蓄積することを明らかにしていたが、本年度はEGが培地中に放出されることを見出した。この分子機構を解明するために、出芽酵母の系を用いた。まず、EG分解酵素欠損株を作製し、さらにこの株にEG合成酵素を過剰発現することでEGが大量に蓄積する株を作製した。このダブル変異株は、細胞内だけでなく培養液にも多量のEGが検出されたことから、出芽酵母には過剰なEGを排出する機構が備わっていると考え、その排出機構を検討した。まず、EGの排出がトランスポーターと分泌小胞のどちらに依存しているのかを明らかにするために、培養6時間後の上清を超遠心分離し、上清（トランスポーター由来EG）と沈殿（分泌小胞由来EG）に分け、それぞれのEG量をLC-MSで定量した。その結果、上清には沈殿の約20倍量のEGが存在していた。従って大部分のEGはトランスポーターを介して培地中に放出されていると推測される。出芽酵母には約３０種類のATP - Binding Cassetteトランスポーター（ABCトランスポーター）が存在する。UGT51 OE/egh1 KOを親株としてABCトランスポーターを欠損した三重変異株を作製したところ、yor1欠損株は培養のどの時期においても培地中のEG量が激減していた。Yor1はオリゴマイシンなどの薬剤排出トランスポーターとして知られているが、本研究によって過剰に合成されたEGの排出にも関与していることが明らかになった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
真菌類のエルゴステリルグルコシド（EG) 合成酵素、分解酵素遺伝子を同定することにより、EGを過剰蓄積する出芽酵母変異株の作製した。この変異株を用いた分子遺伝学的な方法によりEG排出トランスポーターを初めて同定することに成功した。
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| Strategy for Future Research Activity |
真菌類のエルゴステリルグルコシド（EG) 合成酵素、分解酵素遺伝子を同定し、それらの遺伝子を欠損したCrypotococcus neoformansを作製することができた。次年度は、それらの変異株を用いた動物実験を実施することで、C. neoformansにおけるEG合成の生理的な意義を探る。
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[Presentation] Discovery and modification of a novel PUFA synthesis system to produce EPA and n-3DPA in thraustochytrids2016
Author(s)
Goda H, Hamaguchi R, Ishibashi Y, Mochinaga S, Sakaguchi K, Sekiguchi T, Ishiwata Y, Okita Y, Okino N, Honda D, Hayashi M, Ito M.
Organizer
57th International Conference of the Bioscience of Lipids
Int'l Joint Research
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[Presentation] Composition, localization, and metabolism of sphingolipids in thraustochytrids2016
Author(s)
Ishibashi Y, Nagatomi M, Tominaga Y, Ohara J, Morimoto M, Abe E, Yamaji-Hasegawa A, Okino N, Kobayashi T, Ito M
Organizer
57th International Conference of the Bioscience of Lipids
Int'l Joint Research
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