2016 Fiscal Year Research-status Report
次世代微細構造３D解析による修復筋周囲の間質細胞相互作用の形態的評価
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15K01631
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| Research Institution | Nippon Sport Science University |
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Principal Investigator |
小林 正利 日本体育大学, 体育学部, 教授 (30320154)
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2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 筋修復 / 筋線維間質 / FIB/SEM / マクロファージ / 線維芽細胞 / 白血球 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
平成27年度に引き続き、骨格筋の損傷・修復過程おいて、筋組織間質に集積する細胞と、これらの細胞同士の相互関係について、微細３次元構造と組織構築を明らかにすることを目的として実験動物の腓腹筋を挫滅した試料を用い、挫滅損傷後の筋組織の経時変化を次世代電子顕微鏡FIB/SEM（Quanta 3D FEG, FEI）をもちいた三次元微細構造解析を順次進めている。
前年度から引き続き、①筋挫滅1日目から5日目まで筋線維周囲（筋組織間質内）に単核細胞が浸潤してきており、1日目には筋線維を貪食する事が確認され、1日目から5日後まで通して損傷筋線維周囲に形態の異なる３種類の単核細胞が細胞接着装置等は確認出来ないが互いに接触し3次元的細胞性のネットワークを形成する所見を得ている。
②損傷7日後の試料を作成し観察するとともに、前年度までに観察してきた損傷筋線維についても再度確認したところ損傷5日、7日には筋線維内への単核細胞の浸潤は確認できなかった。一方で7日目の試料では筋線維中央に核が1列に数珠つなぎに揃っていることが観察され、筋線維が再生していることを示す所見が確認された。
③損傷5日、7日後どちらの試料も筋線維周囲には間質細胞のネットワークは続けて観察され、間質細胞同士が相互に接触し合い再生筋をバスケット状に囲んでいることが示唆する所見が得られた。
ここまでの3次元微細形態観察・解析の結果かから、これらの細胞性ネットワークは筋修復過程で偶然接触したものではない可能性が考えられ、サイトカイン等の液性制御だけでなく間質細胞相互のダイレクトコンタクトによる制御をうける可能性が予想される。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
FIB/SEMによる解析については順調に試料作製が進んでおり、解析も順次進めている。しかしながら、本研究計画で対象とする３次元的細胞性ネットワークの微細構造については、国内でFIB/SEM観察の先端をいく久留米大にて画像取得を進めているが、FIB/SEMの使用頻度が極めて高く、観察試料の数が限られているためこの点が進行を遅らせている。
また、予想以上に3次元解析にも時間がかかっており、FIB/SEM tomography法で効率良く解析するため方法の最適化を模索・検討している。現在は連続画像を解析ソフトのAmiraによる画像解析法で検討しているが、時間と労力を最適とする他の解析方法についても検討中である。このため損傷後組織に心中してくる細胞腫の同定に必要な免疫組織化学染色観察試料作成に着手できていない現状がある。
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| Strategy for Future Research Activity |
引き続き、筋損傷モデル動物の免疫組織化学観察用試料を作成し、FIB/SEMで損傷後に筋間質に観察された細胞について細胞腫を同定すること、肝細胞マーカーや細胞接着分子に対する抗体を用いて染色し細胞の機能についても解析を重視していく。
また、実験動物用の伸張性収縮装置を用いて、電顕観察用の資料を作成し、伸張性収縮後の筋間質の微細三次元組織構築、細胞構築についてもFIB/SEMをもちいて検討を進めていく予定である。
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| Causes of Carryover |
久留米大学への打ち合わせの旅費精算の際に差額が出たため、次年度使用額が生じた。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
平成29年度については、平成28年度からの繰越額を含めて当初計画書に記載したとおり、試薬類の消耗品として予算を使用するほか、学会発表および打ち合わせの為の旅費、論文作成費等に使用する予定である。
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Research Products
(1 results)
