2016 Fiscal Year Research-status Report
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15K06772
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
黒田 啓介 名古屋大学, 医学系研究科, 特任助教 (80631431)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 神経化学 / 細胞内情報伝達 / シグナル解析 / 細胞種特異的 / アデノ随伴ウイルス / ドーパミン / Rho / リン酸化 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
平成27年に作製したRhoAの野生型や恒常活性型、RhoAを不活性化するp190RhoGAPを細胞特異的に発現するアデノ随伴ウイルス（AAV）をドーパミンD1受容体発現細胞に発現させ、神経細胞の形態解析、コカインによる条件付け場所指向性試験（CPP）試験を行ったところ、形態が大きく変化し、CPP試験においても変化が認められた。
RhoAはアクチン細胞骨格を制御することで細胞の形態を変化させる。そのため、CPPおける変化が、RhoAによる直接的な作用か、細胞形態変化を介した二次的な作用であるかを確認するためには、RhoAの活性をより素早く制御する必要が出てきた。そこで標的タンパク質を時期・部位特異的に発現させるpAAV-TetOne-Flexシステムを開発した。
pAAV-TetOne-FlexシステムにRhoAを不活性化するC3トキシンを組み込んだAAV-TetOne-Flex-C3を作製した。C3トキシンを神経細胞に長期間発現させると細胞がアポトーシスを起こすことを、共同研究を行っている小林らと報告した。D1受容体発現細胞にC3トキシンを一時的に発現させ、CPP試験を行ったところ、大きな変化が認められた。
また、RhoAはRho-kinase (ROCK1/2)の活性を制御していることが知られている。Rock1のコンディショナルノックアウトマウスを入手し、Rock2のコンディショナルノックアウトマウスの作製を開始した。
ドーパミンD2受容体発現細胞特異的にCreを発現するDrd2-Cre Tgマウスを平成27年に入手したが、このマウスは線条体側坐核以外にもCreを発現させる細胞が存在する。線条体・側坐核のドーパミンD2受容体発現細胞特異的にCreを発現するAdora2a-Cre Tgマウスを新たに入手し繁殖した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
1: Research has progressed more than it was originally planned.
Reason
平成27年に研究が計画以上に進展したため、平成28年度は新たに標的タンパク質を時期・部位特異的に発現させるpAAV-TetOne-Flexシステムの開発に取り組むことが出来た。pAAV-TetOne-Flexシステムの開発は順調に進んでおり、さらなる成果が期待できる。
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| Strategy for Future Research Activity |
・引き続き側坐核において神経細胞の形態解析実験やCPP試験、電気生理実験を行う。
・開発したpAAV-TetOne-Flexシステムを用いてRhoAの活性を時期特異的に制御し、情動記憶の制御機構のより詳細な解析を行う。
・作製したRho-kinaseコンディショナルノックアウトマウスの解析を行う。
・これまでに重要であることが認められたRap1やRhoAなどのシグナル分子について、その活性調節機構の解明と、Rap1やRhoAシグナルによる情動記憶の制御機構の解明をすすめる。
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| Causes of Carryover |
Rho-kinaseのコンディショナルノックアウトマウスを作製した際に、予定よりも少額で作製することが出来たため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度の研究推進のための、消耗品購入、コンディショナルノックアウトマウスの入手に使用する。
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Research Products
(10 results)
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[Journal Article] Focused Proteomics Revealed a Novel Rho-kinase Signaling Pathway in the Heart2016
Author(s)
Yura Y, Amano M, Takefuji M, Bando T, Suzuki K, Kato K, Hamaguchi T, Hasanuzzaman Shohag M, Takano T, Funahashi Y, Nakamuta S, Kuroda K, Nishioka T, Murohara T, Kaibuchi K
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Journal Title
Cell Structure and Function
Volume: 41
Pages: 105-120
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] RhoAはスパイン形態と行動を制御する2017
Author(s)
中ノ瀬 友稀, 黒田 啓介, 張 心健, 織田 海秀, 永井 拓, 貝淵 弘三
Organizer
第90回日本薬理学会年会
Place of Presentation
長崎ブリックホール、長崎新聞文化ホール（長崎県長崎市）
Year and Date
2017-03-15 – 2017-03-17
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