2016 Fiscal Year Research-status Report
食品由来廃棄物を有効活用した新規ビフィズス菌増殖因子の創成
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15K07448
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| Research Institution | Kindai University |
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Principal Investigator |
芦田 久 近畿大学, 生物理工学部, 教授 (40379087)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | ビフィズス菌 / プレバイオティクス / グリコシダーゼ / エステラーゼ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
前年度までに、梅酢より調製された「梅ポリフェノール」中にビフィズス菌増殖因子が含まれていることを明らかにした。Bifidobacterium catenulatum, B. pseudocatenulatum, B. angulatumに対して活性のあるポリフェノール配糖体は、HPLCやMS等の分析により、アセチル化ショ糖にフェルラ酸がエステル結合したプルノースの類縁体であることが明らかになり、これら３種のビフィズス菌はフェルラ酸エステラーゼ活性によりアセチル化ショ糖を遊離させ資化していることがわかった。そこで、B. pseudocatenulatumよりゲノムDNAライブラリーを大腸菌中で構築し、pNP-フェルラ酸に対する活性を指標に発現クローニングを試みた。現在、得られたクローンに含まれるDNA挿入断片を解析中である。
B. longum subsp. longumに対しては、多糖画分が増殖促進活性を示した。菌体を多糖画分に作用させると、アラビノースおよび構造未知の３糖が遊離した。後者についてはMS解析をおこなったところ、アラビノース-(メチルグルクロン酸-)ガラクトースと推定されるm/z値が観測された。この構造はアラビノガラクタンの非還元末端に存在することが報告されている。また、アラビノースの遊離に関しては、ゲノム情報から糖質加水分解酵素ファミリー43に属する未解析のBLLJ_1852とBLLJ_1853が、アラビナンに作用してアラビノースを遊離するα1,2/α1,3-アラビノフラノシダーゼとα1,5-アラビノフラノシダーゼであることが組換え酵素の解析により明らかになった。これらを「梅ポリフェノール」に作用させるとアラビノースが遊離した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
新奇と推定される酵素の遺伝子を発現クローニング法で同定しようと試みたが、予想外に難航し、解析が遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
新奇酵素と考えているフェルラ酸エステラーゼ、および、アラビノガラクタンの非還元末端からアラビノース-(メチルグルクロン酸-)ガラクトースを遊離する新奇β-ガラクトシダーゼの遺伝子を発現クローニング法で同定する。
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| Causes of Carryover |
研究計画に若干の遅れを生じ376,979円の余剰金が出たため、これを次年度に繰り越すこととした。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
試薬等の消耗品の購入に充てる。
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[Journal Article] Application study of 1,2-α-l-fucosynthase: introduction of Fucα1-2Gal disaccharide structures on N-glycan, ganglioside, and xyloglucan oligosaccharide2017
Author(s)
Sugiyama Y, Katoh T, Honda Y, Gotoh A, Ashida H, Kurihara S, Yamamoto K, Katayama T
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Journal Title
Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry
Volume: 81
Pages: 283-291
DOI
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[Journal Article] Introduction of H-antigens into oligosaccharides and sugar chains of glycoproteins using highly efficient 1,2-α-l-fucosynthase2016
Author(s)
Sugiyama Y, Gotoh A, Katoh T, Honda Y, Yoshida E, Kurihara S, Ashida H, Kumagai H, Yamamoto K, Kitaoka M, Katayama T
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Journal Title
Glycobiology
Volume: 26
Pages: 1235-1247
DOI
Peer Reviewed
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