2015 Fiscal Year Research-status Report
独自システムによるホモKOマイクロミニブタ細胞の効率的濃縮とその応用
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15K07695
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| Research Institution | Kagoshima University |
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Principal Investigator |
佐藤 正宏 鹿児島大学, 医用ミニブタ・先端医療開発研究センター, 教授 (30287099)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
三好 和睦 鹿児島大学, 農水産獣医学域農学系, 教授 (70363611)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | マイクロミニブタ / 胎仔性繊維芽細胞 / CRISPR/Cas9 / ゲノム編集 / targeted toxin / LDLR / 動脈硬化 / 体細胞核移植 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究課題では、最近開発された次世代型ノックアウト（KO）と呼ばれるCRISPR/Cas9などのゲノム編集技術を用いてブタ（マイクロミニブタ）胎仔由来の繊維芽細胞（MPEF）ゲノム内の特定遺伝子（異種移植関連遺伝子alpha-1,3-galactosyltransferase [alpha-GalT]や動脈硬化責任遺伝子low density lipoprotein receptor [LDLR]）を完全に破壊し、我々がこれまでに独自に開発したKO細胞のみを効率的に濃縮する系（targeted toxin-based selection）を用いて遺伝子改変MPEF株を作製し、最終的にその細胞をドナーとする体細胞核移植によるクローン個体作製、それによる動脈硬化モデルブタ作製を試みる。平成２7年度ではMPEFから遺伝子改変細胞株取得を行った。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
alpha-GalT, LDLR遺伝子のKOを行い、得られた株の約30%はdouble ホモKO、約60%はalpha-GalTホモKO/LDLRヘテロKOという良好な成績を得た。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成28度では、平成27度に得られたdouble ホモKO MPEF株をドナーとする体細胞核移植を行い、移植胚のレシピエントメスブタ（産業ブタ）への移植によるクローンブタ個体作製を行う。一方で、体細胞核移植された胚（胚盤胞）を用いて、当該胚を構成する細胞がdouble ホモKOの特性を有するかを分子生物学的、免疫組織化学的に検討する。
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[Journal Article] One-step generation of multiple transgenic mouse lines using an improved Pronuclear Injection-based Targeted Transgenesis (i-PITT).2015
Author(s)
Ohtsuka M, Miura H, Mochida K, Hirose M, Hasegawa A, Ogura A, Mizutani R, Kimura M, Isotani A, Ikawa M, Sato M、Gurumurthy CB
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Journal Title
BMC Genomics
Volume: 16
Pages: 274
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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[Journal Article] Choice of feeders is important when first establishing iPSCs derived from primarily cultured human deciduous tooth dental pulp cells.2015
Author(s)
Saitoh I, Inada E, Iwase Y, Noguchi H, Murakami T, Soda M, Kubota N, Hasegawa H, Akasaka E, Matsumoto Y, Oka K, Yamasaki Y, Hayasaki H, Sato M
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Journal Title
Cell Medicine
Volume: 8
Pages: 9-23
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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