食物アレルギーにおける食物アレルゲンを発現する乳酸菌ワクチン研究

2015 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K07756
• Research Institution: Azabu University
• Principal Investigator: 阪口 雅弘 麻布大学, 獣医学部, 教授 (20170590)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 五十君 静信 国立医薬品食品衛生研究所, その他部局等, その他 (70212743)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 食物アレルギー / イヌ / オボアルブミン / アレルゲン / 乳酸菌

Outline of Annual Research Achievements

H27年度は作製したオボアルブミン(OVA)産生遺伝子組換え乳酸菌（OVA産生乳酸菌）をマウス投与して、産生されたOVAがマウスに抗原として認識されているか検討を行った。最初にOVA産生乳酸菌(50億個)をBalb/cマウス胃内投与（9日間6回投与）後、16日目、28日目にOVA(10ug)とアラム・アジュバント(2mg)の腹くう内投与（2回）を行った。また、14日目、35日目に血清を採取してOVA産生乳酸菌群と非投与群においてOVA特異的IgE,IgG1,IgG2a,IgAを測定したが有意な差は認められなかった。また、38日目にOVAを投与によるアナフィラキシー反応の誘導試験を行ったところ、OVA産生乳酸菌群のアナフィラキシー反応の軽減の傾向は認められたが、有意な差は投与群および非投与群の間で認められなかった。同時にマウスから脾臓細胞を採取してOVA特異的なTreg細胞の誘導を調べてところ、有意な差は投与群および非投与群の間で認められなかった。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

H27年度においてOVA産生乳酸菌を作製し、予備的実験としてマウスでの投与実験を行った。特異的IgE産生抑制やアナフィラキシー反応の軽減においてOVA産生乳酸菌投与群と非投与群と有意差がなかった。マウスに投与した乳酸菌数は50億個と十分量であることから、この原因としてOVA産生乳酸菌のOVAの発現量が不十分と考えられた。すなわち、乳酸菌にOVA遺伝子などの遺伝子を乳酸菌に挿入してそれぞれタンパクを発現できる技術等は確立できたが、経口投与でも十分にそのタンパクが免疫系に認識できるほどの量を発現できなかったと思われる。

Strategy for Future Research Activity

H28年度では本研究で行う実験で経口接種において免疫系に認識されるOVA量を検討するため、OVAタンパクと乳酸菌を投与後、OVAとアラム・アジュバントの腹くう内投与を行って有効なOVA量を決定する。さらに上述の実験において推定されたOVAの発現量を目安にOVA産生遺伝子組換え乳酸菌の作製をやり直す予定である。作製し直したOVA産生遺伝子組換え乳酸菌を使用してOVAのT細胞エピトープを発現するトランスジニックマウス(DO11.10)での実験を行う。

Research Products

• [Journal Article] Characterization of Pseudomonas aeruginosa phage KPP21 belonging to family Podoviridae genus N4-like viruses isolated in Japan (2016)
  • Author(s): Shigehisa, R., Uchiyama, J., Kato S, Takemura-Uchiyama, I, Yamaguchi, K., Miyata, R., Ujihara, T., Sakaguchi, Y., Okamoto, N., Shimakura, H., Daibata, M., Sakaguchi, M., and Matsuzaki, S.
  • Journal Title: Microbiology and Immunology Volume: 60 Pages: 64-67
  • DOI: 10.1111/1348-0421.12347
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Cross-reactivity between major IgE core epitopes on Cry j 2 allergen of Japanese cedar pollen and relevant sequences on Cha o 2 allergen of Japanese cypress pollen (2016)
  • Author(s): Miyaji, K., Okamoto, N., Saito, S., Yasueda, H., Takase, Y., Shimakura, H., Saito, S., and Sakaguchi, M.
  • Journal Title: Allergology International Volume: in press Pages: in press
  • DOI: in press
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Analysis of KHP30-like prophage in the genome of Helicobacter 4 pylori strain NY40. (2016)
  • Author(s): Uchiyama, J , Takemura-Uchiyama, I., Kato, S., Takeuchi, H., Sakaguchi, Y., Ujihara, T., Daibata, M., Shimakura, H., Okamoto, N., Sakaguchi, M., Matsuzaki, S.
  • Journal Title: FEMS Microbiology Letters Volume: in press Pages: in press
  • DOI: in press
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Japanese Society of Allergology task force report on standardization of house dust mite allergen vaccines. (2015)
  • Author(s): Takai, T., Okamoto, Y., Okubo, K., Nagata, M., Sakaguchi, M., Fukutomi, Y., Saito, A., Yasueda, H., and Masuyama, K.
  • Journal Title: Allergology International Volume: ６４ Pages: １８１－１８６
  • DOI: 10.1016/j.alit.2015.01.005
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Cats as a potential source of emerging influenza virus infections (2015)
  • Author(s): Horimoto. T., Gen, F., Murakami, S., Iwatsuki-Horimoto, K., Kato, K., Hisasue, M., Sakaguchi, M., Nidom, C.A., and Kawaoka, Y
  • Journal Title: Virologica Sinica Volume: ３０ Pages: 221-223
  • DOI: 10.1007/s12250-015-3580-9
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
• [Presentation] 食物有害反応を示す犬における卵白抗原に対するIgE反応性の検討 (2015)
  • Author(s): 島倉秀勝、齋藤拓、藤村正人 、岡本憲明、内山淳平、阪口雅弘
  • Organizer: 第158回日本獣医学会
  • Place of Presentation: 十和田
  • Year and Date: 2015-09-07 – 2015-09-09