食物アレルギーにおける食物アレルゲンを発現する乳酸菌ワクチン研究

2016 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K07756
• Research Institution: Azabu University
• Principal Investigator: 阪口 雅弘 麻布大学, 獣医学部, 教授 (20170590)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 五十君 静信 国立医薬品食品衛生研究所, 食品衛生管理部, 客員研究員 (70212743)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 食物アレルギー / イヌ / オボアルブミン / アレルゲン / 乳酸菌

Outline of Annual Research Achievements

H28年度は経口接種において免疫系に認識されるOVA（オボアルブミン）量を検討するため、３週間にわたってOVAタンパクと乳酸菌を経口投与後、OVAとアラム・アジュバントのマウスの腹くう内投与を２回行って有効なOVA量の検討を行った。経口投与したOVA量は1μgから 10mgであった。最終的なOVAとアラム・アジュバントの腹くう内投与１週間後にマウスから採血を行い、OVA特異的IgEの測定をELISA法で行った。OVA特異的IgEの抑制効果は用量依存的な抑制が見られ、10μgのOVA経口投与した群でもOVA特異的IgE抗体の抑制が認められた。この結果によって、OVA発現乳酸菌ワクチンにおいて、10μg以上のOVAの含有量が必要と考えられた。また、H28年度は食物アレルギーを示す８２頭のイヌにおけるOVAに対するIgE抗体の反応性をELISA法を用いて検討した。最初に一般的な食物アレルゲンである卵白の粗抗原に対するIgE抗体を測定したところ、82頭中8頭(9.8%)が陽性を示した。さらにこの粗抗原に対するIgE陽性の8頭においてOVA特異的IgE抗体が存在するか調べたところ、8頭中6頭(75.0%)はOVAに陽性を示した。上記のELISA法で得られた結果の検証のため、ウェスタンブロット法を行った。ウェスタンブロットにおいてもOVA特異的IgE抗体が検出された。この結果によって、OVAがイヌの主要な卵白精製抗原だということが示唆された。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

H28年度において経口接種において免疫系に認識されるOVA（オボアルブミン）量を検討するため、OVAタンパクと乳酸菌を経口投与後、OVAとアラム・アジュバントのマウスの腹くう内投与を有効なOVA量の検討を行った。この結果によって、OVA発現乳酸菌ワクチンにおいて、10μg以上のOVAの含有量が必要と考えられた。現在、OVA発現乳酸菌ワクチン中に含まれるOVA量はngレベルでμgレベルには達していない。また、OVA発現乳酸菌ワクチンを自然発症の食物アレルギー犬に臨床応用を検討するための基礎的検討としてアレルギー犬の血清中のOVA特異IgE抗体の測定を行った。食物アレルギー犬８２頭中８頭でOVA特異IgE抗体が検出された。今後、これらの自然発症の食物アレルギー犬での研究の可能性が開かれた

Strategy for Future Research Activity

H29年度では１回の投与量で10μg以上のOVA発現量を目安にOVA産生遺伝子組換え乳酸菌の作製をやり直す予定である。さらに並行して大腸菌でOVA組み換え体を作製してそのOVAを乳酸菌の表面に結合させるOVA結合乳酸菌ワクチンの作製も併せて行う予定である。この方法であれば、十分量（10μg以上）のOVAを乳酸菌に結合させたワクチンが比較的簡単に作製できると考えられる。また、本研究において、初めて自然発症の食物アレルギー犬においてOVAがアレルゲンになっていることが明らかになった。OVAと乳酸菌を組み合わせた食物アレルギーワクチンにおける臨床応用に可能性も開かれた。本年度もさらに食物アレルギー犬におけるOVAの反応性を詳しく解析する予定である。

Causes of Carryover

本年度は十分な試薬・消耗品を購入して年度内でも十分に使用可能であることがわかった。また、次年度（110万円）は本年度(150万円）に比べ、大幅に研究予算が減少するため、次年度に向けて試薬・消耗品が十分に購入できるように予算の繰り延べを希望します。

Expenditure Plan for Carryover Budget

繰り延べした24739円は次年度の研究代表者である阪口の試薬・消耗品費（40万円予定）と合わせてに試薬・消耗品費に使用する予定である。

Research Products

• [Int'l Joint Research] ウィスコンシン 大学(米国)
  • Country Name: U.S.A.
  • Counterpart Institution: ウィスコンシン 大学
• [Journal Article] Identification of the PLA2G6 c.1579G>A missense mutation in papillon dog neuroaxonal dystrophy using whole exome sequencing analysis. (2017)
  • Author(s): Tsuboi, M., Watanabe, M., Nibe, K., Yoshimi, N., Kato, A., Sakaguchi, M., Yamato, O., Tanaka, M., Kuwamura, M., Kushida, K., Ishikura, T., Harada, T., Chambers, J.K., Sugano, S., Uchida, K., and Nakayama, H.
  • Journal Title: Plos one Volume: 12 Pages: 1-17
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0169002
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Characterization of Pseudomonas aeruginosa phage KPP21 belonging to family Podoviridae genus N4-like viruses isolated in Japan. (2016)
  • Author(s): Shigehisa, R., Uchiyama, J., Kato S, Takemura-Uchiyama, I, Yamaguchi, K., Miyata, R., Ujihara, T., Sakaguchi, Y., Okamoto, N., Shimakura, H., Daibata, M., Sakaguchi, M., and Matsuzaki, S
  • Journal Title: Microbiology and Immunology Volume: 60 Pages: 64-67
  • DOI: 10.1111/1348-0421.12347
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Cross-reactivity between major IgE core epitopes on Cry j 2 allergen of Japanese cedar pollen and relevant sequences on Cha o 2 allergen of Japanese cypress pollen. (2016)
  • Author(s): Miyaji, K., Okamoto, N., Saito, S., Yasueda, H., Takase, Y., Shimakura, H., Saito, S., and Sakaguchi, M.
  • Journal Title: Allergology and International Volume: ６５ Pages: 286-292
  • DOI: 10.1016/j.alit.2016.01.003
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Analyses of short-term antagonistic evolution between Pseudomonas aeruginosa strain PAO1 and phage KPP22 belonging to family Myoviridae genus PB1-like viruses. (2016)
  • Author(s): Uchiyama, J., Suzuki, M., Kato, S., Miyata, R., Nasukawa, T., Yamaguchi, K., Hirayama, R., Takemura-Uchiyama, I., Ujihara, T., Shimakura, S., Murakami, H., Sakaguchi, Y., Sakaguchi, M., Matsuzaki, S.:
  • Journal Title: Applied and Environmental Microbiology Volume: 82 Pages: 4482-4491
  • DOI: 10.1128/AEM.00090-16
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Screening of KHP30-like prophage in the genome of Helicobacter 4 pylori strain NY40. (2016)
  • Author(s): Uchiyama, J, Takemura-Uchiyama, I., Kato, S., Takeuchi, H., Sakaguchi, Y., Ujihara, T., Daibata, M., Shimakura, H., Okamoto, N., Sakaguchi, M., Matsuzaki, S.
  • Journal Title: FEMS Microbiology Letters Volume: 363 Pages: 1-9
  • DOI: 10.1093/femsle/fnw157
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] IgE reactivity to hen’s egg white allergens in dogs with cutaneous adverse food reactions. (2016)
  • Author(s): Shimakura, H., Saito, T., Uchiyama, J., Miyaji, K., Fujimura, M., Masuda, K., Okamoto, N., DeBoer, D.J., Sakaguchi, M.
  • Journal Title: Veterinary Immunology and Immunopathology Volume: 177 Pages: 52-57
  • DOI: 10.1016/j.vetimm.2016.06.003
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Inefficient viral replication of bovine leukemia virus induced by spontaneous deletion mutation on G4 gene. (2016)
  • Author(s): Murakami, H., Uchiyama, J., Nikaido, S., Sato, R., Sakaguchi, M., Tsukamoto, K.
  • Journal Title: Journal of General Virology Volume: 97 Pages: 2753-2762
  • DOI: 10.1099/jgv.0.000583
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Nationwide distribution of bovine influenza D virus infection in Japan. (2016)
  • Author(s): Horimoto, T., Hiono, T., Mekata, H., Odagiri, T., Lei, Z., Kobayashi, T., Norimine, J., Inoshima, Y., Hikono, H., Murakami, K., Sato, R., Murakami, H., Sakaguchi, M., Ishii, K., Ando, T., Otomaru, K., Ozawa, M., Sakoda, Y. and Murakami, S.
  • Journal Title: Plos one Volume: 11 Pages: 1-7
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0163828
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Presentation] Study of adsorption of AHJD-like phages infecting Staphylococcus aureus (2017)
  • Author(s): Jumpei Uchiyama, Kenshi Kurokawa, Iyo Takemura-Uchiyama, Takako Ujihara, Yoshihiko Sakaguchi, Masahiro Sakaguchi, Shigenobu Matsuzaki
  • Organizer: 第９０回日本細菌学会
  • Place of Presentation: 仙台
  • Year and Date: 2017-03-19 – 2017-03-21
• [Presentation] 犬アトピー性皮膚炎症例におけるEnterococcus faecalis FK-23投与と臨床症状の変化にする研究 多施設実施二重盲検無作為プラセボ比較試験 (2017)
  • Author(s): 大隅尊史、阪口雅弘、嶋田貴志、辻本元
  • Organizer: 第20回獣医皮膚科学学会
  • Place of Presentation: 大宮
  • Year and Date: 2017-03-11 – 2017-03-12
• [Presentation] DogFilerを用いた犬種推定法の検討 (2016)
  • Author(s): 旭 愛、岡本憲明、関口和正、阪口雅弘、武内ゆかり、松田秀明
  • Organizer: 第22回日本法科学技術学会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2016-11-10 – 2016-11-11
• [Presentation] Serological survey reveals the wide distribution of bovine influenza D virus infection in Japan (2016)
  • Author(s): Taisuke Horimoto, Tomoha Odagiri, Zhihao Lei, Tomoya Kobayashi, Maiko Endo, Akiko Uema, Hirohisa Mekata, Junzo Norimine, Kenji Murakami, Hironobu Murakami, Masahiro Sakaguchi, Kazunori Ishii, Yasuo Inoshima, Makoto Ozawa, Takahiro Hiono, Yoshihiro Sakoda, Benjamin Hause, Shin Murakami
  • Organizer: 第64回日本ウイルス学会
  • Place of Presentation: 札幌
  • Year and Date: 2016-10-23 – 2016-10-25
• [Presentation] ダニアレルゲンワクチン標準化に関する日本アレルギー学会タスクフォース報告 (2016)
  • Author(s): 高井敏朗、岡本美孝、大久保)公裕、永田真、阪口雅弘、福冨友馬、齋藤明美、安枝、浩、増山敬祐
  • Organizer: 第６５回日本アレルギー学会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2016-06-17 – 2016-06-19
• [Book] 有害微生物の制御と管理 (2016)
  • Author(s): 阪口雅弘
  • Total Pages: 664
  • Publisher: テクノシステム