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2016 Fiscal Year Research-status Report

輸送体群を束ね局在を制御する腎尿細管上皮細胞新規膜タンパク質の機能の解明

Research Project

Project/Area Number 15K08274
Research InstitutionOsaka University

Principal Investigator

永森 收志  大阪大学, 医学系研究科, 准教授 (90467572)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 大垣 隆一  大阪大学, 医学系研究科, 助教 (20467525)
奥田 傑  大阪大学, 医学系研究科, 助教 (50511846)
Project Period (FY) 2015-04-01 – 2018-03-31
Keywords膜輸送複合体 / プロテオミクス / トランスポーター / 腎臓 / 糖 / アミノ酸
Outline of Annual Research Achievements

研究代表者は、多数の腎近位尿細管管腔側膜輸送体と共に発現変動する遺伝子を、バイオインフォマティクスによって見出した。 その遺伝子がコードするタンパク質TRAPは、腎特異的に発現する新規膜タンパク質であり、近位尿細管管腔側膜 に局在した。TRAPノックアウトマウスは、糖・アミノ酸・尿酸などの尿中排泄が顕著に上昇するファンコニー(Fanconi)症候群類似のフェノタイプを示し、さらにそれらを輸送可能な複数の輸送体の局在が変化していた。そこでTRAPが管腔側膜輸送体の局在を統合的に制御する分子であると想定し研究を進めたところ、TRAPが様々な輸送体と複合体を形成していることを見いだした。それに基づいてTRAPと相互作用する管腔側膜輸送体群の全体像と、それら輸送体の局在をTRAPが制御する機構を解析した。網羅的定量プロテオミクスによりTRAPの欠失により発現量の影響を受ける輸送体を明らかにし、免疫染色によりTRAPが輸送体の局在を規定することを示した。さらに、TRAPが結合する一群の管腔側膜輸送体を明らかにし、定量的に解析した。またTRAPノックアウトマウスのフェノタイプに性差があることが分かったため、これまでオスを用いて研究を進めてきたが、メスについても研究対象にし、解析を進めている。加えて、TRAPノックアウトマウスでは細胞増殖因子GFxの著しい変動が起こることを明らかにしたことから、細胞増殖因子GFxの制御機構とTRAPの関連の解明を進めている。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

網羅的比較定量プロテオミクスによるTRAPノックアウトマウス尿細管輸送体の変動解析をおこない、TRAPノックアウトマウスの管腔側膜上での各輸送体の存在量を野生型マウスと比較することにより、TRAPの役割についての重要な情報を得た。変化が見いだされた輸送体のうち、いくつかについては、Western blotでその変化を確認するとともに、免疫染色を行い輸送体タンパク質の局在の変動を検討した。さらに高空間分解顕微鏡SIM (Structured illumination microscopy)を用いることで、TRAPノックアウトマウスにおいて、局在の変化を示す輸送体の一部について、より正確な輸送体の局在位置の変化を把握することに成功した。さらに、尿細管管腔側膜画分膜小胞を調整し、複数の化合物の輸送機能を、RI標識した基質を用いて測定し、TRAPノックアウトマウスにおける輸送体の発現量変動と機能変化について、定量的な解析を進めた。 加えて、 管腔側膜輸送体の機能を維持するTRAPの役割を明らかにするために、抗TRAP抗体を用いた免疫沈降を行い、免疫沈降物を定量型質量分析計で解析し、輸送体との複合体形成の有無を検討し、TRAPと結合している管腔側膜輸送体を定量的に解析した。またTRAPノックアウトマウスが示すフェノタイプに、性差があることが示された。これまでオスを用いて研究を進めてきたが、メスについても研究対象にし解析を進めた。加えて、TRAPノックアウトマウスでは細胞増殖因子Xの著しい変動が起こることが見いだされた。細胞増殖因子Xの制御機構とTRAPの関連の解明を進めている。

Strategy for Future Research Activity

これまでの詳細な検討から、近位尿細管管腔側膜輸送体のうち、TRAPと連携するものが明らかになっている。それぞれの輸送体がTRAPと直接結合しているのか、他の因子を介しているのか明らかにする。また、TRAP機能の性差や細胞増殖因子との関連など想定外の発見があったため、当初の研究計画にこれらの解析を加える。

Causes of Carryover

今年度の研究の進展により、性差及び週齢を考慮した解析が必要になった。しかしながら、実験動物の準備に時間がかかったため、必要経費の一部を次年度に繰り越した。

Expenditure Plan for Carryover Budget

対象とする実験動物の準備が整い次第、性差及び週齢を考慮した解析を行う。解析の内容は、網羅的定量プロテオミクス及びメタボロミクスに加え、様々な生化学的解析を主に行う。

  • Research Products

    (20 results)

All 2017 2016 Other

All Int'l Joint Research (2 results) Journal Article (10 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Peer Reviewed: 10 results,  Open Access: 2 results) Presentation (8 results) (of which Int'l Joint Research: 3 results,  Invited: 5 results)

  • [Int'l Joint Research] IRB/バルセロナ大学(スペイン)

    • Country Name
      SPAIN
    • Counterpart Institution
      IRB/バルセロナ大学
  • [Int'l Joint Research] コロンビア大学(米国)

    • Country Name
      U.S.A.
    • Counterpart Institution
      コロンビア大学
  • [Journal Article] Utilization of Liver Microsomes to Estimate Hepatic Intrinsic Clearance of Monoamine Oxidase Substrate Drugs in Humans.2017

    • Author(s)
      Masuo Y, Nagamori S, Hasegawa A, Hayashi K, Isozumi N, Nakamichi N, Kanai Y, Kato Y.
    • Journal Title

      Pharmaceutical Research

      Volume: 34(6) Pages: 1233-1243

    • DOI

      10.1007/s11095-017-2140-4

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Essential roles of L-type amino acid transporter 1 in syncytiotrophoblast development by presenting fusogenic 4F2hc.2017

    • Author(s)
      Ohgaki R, Ohmori T, Hara S, Nakagomi S, Kanai-Azuma M, Kaneda-Nakashima K, Okuda S, Nagamori S, Kanai Y.
    • Journal Title

      Mol Cell Biol.

      Volume: 印刷中 Pages: 印刷中

    • DOI

      10.1128/MCB.00427-16

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Structure-activity relationship of a novel series of inhibitors for cancer type transporter L-type amino acid transporter 1 (LAT1).2017

    • Author(s)
      Kongpracha P, Nagamori S, Wiriyasermkul P, Tanaka Y, Kaneda K, Okuda S, Ohgaki R, Kanai Y.
    • Journal Title

      J Pharmacol Sci.

      Volume: 133 Pages: 96-102

    • DOI

      10.1016/j.jphs.2017.01.006.

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Increased Dynamics of Tricarboxylic Acid Cycle and Glutamate Synthesis in Obese Adipose Tissue: IN VIVO METABOLIC TURNOVER ANALYSIS.2017

    • Author(s)
      Nagao H, Nishizawa H, Bamba T, Nakayama Y, Isozumi N, Nagamori S, Kanai Y, Tanaka Y, Kita S, Fukuda S, Funahashi T, Maeda N, Fukusaki E, Shimomura I.
    • Journal Title

      J Biol Chem.

      Volume: 292 Pages: 4469-4483

    • DOI

      10.1074/jbc.M116.770172.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] 18F-FBPA as a tumor-specific probe of L-type amino acid transporter 1 (LAT1): a comparison study with 18F-FDG and 11C-Methionine PET.2017

    • Author(s)
      Watabe T, Ikeda H, Nagamori S, Wiriyasermkul P, Tanaka Y, Naka S, Kanai Y, Hagiwara K, Aoki M, Shimosegawa E, Kanai Y, Hatazawa J.
    • Journal Title

      Eur J Nucl Med Mol Imaging.

      Volume: 44 Pages: 321-331

    • DOI

      10.1007/s00259-016-3487-1.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Expression of a human NPT1/SLC17A1 missense variant which increases urate export.2016

    • Author(s)
      Sakiyama M, Matsuo H, Nagamori S, Ling W, Kawamura Y, Nakayama A, Higashino T, Chiba T, Ichida K, Kanai Y, Shinomiya N.
    • Journal Title

      Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids.

      Volume: 35 Pages: 536-542

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Efficacy of system l amino acid transporter 1 inhibition as a therapeutic target in esophageal squamous cell carcinoma.2016

    • Author(s)
      Ohshima Y, Kaira K, Yamaguchi A, Oriuchi N, Tominaga H, Nagamori S, Kanai Y, Yokobori T, Miyazaki T, Asao T, Tsushima Y, Kuwano H, Ishioka NS.
    • Journal Title

      Cancer Sci.

      Volume: 107 Pages: 1499-1505

    • DOI

      10.1111/cas.13021.

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Core-fucosylation plays a pivotal role in hepatitis B pseudo virus infection: a possible implication for HBV glycotherapy.2016

    • Author(s)
      Takamatsu S, Shimomura M, Kamada Y, Maeda H, Sobajima T, Hikita H, Iijima M, Okamoto Y, Misaki R, Fujiyama K, Nagamori S, Kanai Y, Takehara T, Ueda K, Kuroda S, Miyoshi E.
    • Journal Title

      Glycobiology.

      Volume: 26 Pages: 1180-1189

    • DOI

      10.1093/glycob/cww067.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Interaction of the Sodium/Glucose Cotransporter (SGLT) 2 inhibitor Canagliflozin with SGLT1 and SGLT2.2016

    • Author(s)
      Ohgaki R, Wei L, Yamada K, Hara T, Kuriyama C, Okuda S, Ueta K, Shiotani M, Nagamori S, Kanai Y.
    • Journal Title

      J Pharmacol Exp Ther.

      Volume: 358 Pages: 94-102

    • DOI

      10.1124/jpet.116.232025.

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Structure-activity relations of leucine derivatives reveal critical moieties for cellular uptake and activation of mTORC1-mediated signaling.2016

    • Author(s)
      Nagamori S, Wiriyasermkul P, Okuda S, Kojima N, Hari Y, Kiyonaka S, Mori Y, Tominaga H, Ohgaki R, Kanai Y.
    • Journal Title

      Amino Acids.

      Volume: 48 Pages: 1045-58

    • DOI

      10.1007/s00726-015-2158-z.

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] 栄養食品成分の吸収・排出を担う膜輸送体の網羅的定量プロテオミクスによる変動解析Comprehensive proteomics reveals alteration of membrane transport proteins responsible for absorption and excretion of nutrients and food ingredients.2017

    • Author(s)
      永森收志
    • Organizer
      シンポジウム「栄養食品成分の吸収と排出~膜を超える仕組み」2017年度 日本農芸化学会年会
    • Place of Presentation
      京都
    • Year and Date
      2017-03-18
    • Invited
  • [Presentation] 膜輸送複合体の機能的再構成人工膜2017

    • Author(s)
      永森收志
    • Organizer
      第6回生体界面研究会
    • Place of Presentation
      金沢
    • Year and Date
      2017-02-10
  • [Presentation] アミノ酸トランスポーターを標的とした創薬研究2016

    • Author(s)
      永森收志
    • Organizer
      第一回名古屋大学医薬系3部局交流シンポジウム ~生物学から創薬への展開~
    • Place of Presentation
      名古屋
    • Year and Date
      2016-11-07
    • Invited
  • [Presentation] 腎近位尿細管に残されていた第二のシスチントランスポーターは、シスチン尿症関連タンパク質rBATの未知なる結合相手だった。2016

    • Author(s)
      永森收志
    • Organizer
      第89回日本生化学会大会、シンポジウム「膜輸送体学の「温故知新」~長年の謎の解明をめざして」
    • Place of Presentation
      仙台
    • Year and Date
      2016-09-27
    • Invited
  • [Presentation] Novel cystine transporter in renal proximal tubule identified as a “missing partner” of cystinuria-related membrane protein rBAT/SLC3A12016

    • Author(s)
      Nagamori S, Wiriyasermkul P, Espino Guarch M, Okuyama K, Nakagomi S, Okuda S, Ohgaki R, Palacin M, Kanai Y.
    • Organizer
      第25回日本尿路結石症学会
    • Place of Presentation
      千葉
    • Year and Date
      2016-07-20
  • [Presentation] Significance of the comprehensive and quantitative proteomics of membrane transport proteins in drug discovery and in silico modeling.2016

    • Author(s)
      Nagamori S.
    • Organizer
      International and Interdisciplinary Symposium 2016“Towards a New Era of Cardiovascular Research”
    • Place of Presentation
      東京
    • Year and Date
      2016-07-13
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] Novel Cystine Transporter in Renal Proximal Tubule Identied as a “Missing Partner” of Cystinuria-Related Membrane Protein rBAT/SLC3A1.2016

    • Author(s)
      Nagamori S, Wiriyasermkul P, Okuyama K, Nakagomi S, Okuda S, Ohgaki R, Kanai Y.
    • Organizer
      The Kaback Symposium
    • Place of Presentation
      米国・メリーランド州ベセスダ
    • Year and Date
      2016-06-09 – 2016-06-10
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] Novel Cystine Transporter in Renal Proximal Tubule Identied as a “Missing Partner” of Cystinuria-Related Membrane Protein rBAT/SLC3A1.2016

    • Author(s)
      Nagamori S, Wiriyasermkul P, Okuyama K, Nakagomi S, Okuda S, Ohgaki R, Kanai Y.
    • Organizer
      Experimental Biology 2016
    • Place of Presentation
      米国・サンディエゴ
    • Year and Date
      2016-04-06
    • Int'l Joint Research

URL: 

Published: 2018-01-16   Modified: 2022-02-16  

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